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1、無(wú)菌操作方式開(kāi)啟凍干菌種管,，加入適量培養(yǎng)液（按菌種選擇培養(yǎng)液,，如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養(yǎng)基,、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養(yǎng)基,、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基），吹吸數(shù)次,，使菌種融化分散,。取含 5.0mL～10.0mL相應(yīng)培養(yǎng)液的試管，滴入少許菌種懸液,，使用恒溫培養(yǎng)箱在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間（一般為30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h～48h）,，此為第1代培養(yǎng)物。

2,、接種環(huán)取第 1 代培養(yǎng)物,，或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠，劃線接種于相應(yīng)培養(yǎng)基平板（按菌種選擇培養(yǎng)基,，如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌復(fù)合瓊脂培養(yǎng)基,、黑曲霉菌選擇MEA培養(yǎng)基）,，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間（一般為36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h～24h、分枝桿菌36℃±1℃ 培養(yǎng) 72h,、黑曲霉菌30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h～48h）,，此為第2代培養(yǎng)物。,。

3,、取第 2 代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于相應(yīng)培養(yǎng)基斜面或平板（按菌種選擇培養(yǎng)基斜面,，如細(xì)菌選擇營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面,、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌復(fù)合瓊脂斜面,、黑曲霉菌選擇MEA培養(yǎng)基平板）,，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間（一般為36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h～24h、分枝桿菌36℃±1℃ 培養(yǎng) 72h,、黑曲霉菌30℃±1℃ 培養(yǎng) 42h～48h）,，此為第3 代培養(yǎng)物,。

4、取第 3 代培養(yǎng)物,，接種于相應(yīng)培養(yǎng)基斜面,，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時(shí)間，此為第4 代培養(yǎng)物,。

5,、按上述方法培養(yǎng)至所需代數(shù)，傳代時(shí)在試管上注明菌種名稱,、菌種號(hào)、代數(shù)及傳代日期等基本信息,。