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接下來(lái)喆圖小編就來(lái)給大家講講用恒溫培養(yǎng)箱做植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的基本原理,，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法和技術(shù),，通過(guò)實(shí)驗(yàn)練習(xí)和鞏固無(wú)菌操作技術(shù)。

1,、實(shí)驗(yàn)所需器材如下

 超凈工作臺(tái),、高壓蒸汽滅菌器、恒溫培養(yǎng)箱,、磁力攪拌器,、恒溫培養(yǎng)搖床、鑷子,、錐形瓶,、水稻種子

2、實(shí)驗(yàn)操作步驟配制培養(yǎng)基

   按照培養(yǎng)基配方取各種藥品,，MAX后用蒸餾水定容到所需體積,。所配制的培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后用，固體瓊脂培養(yǎng)基分裝在250mL 的錐形瓶?jī)?nèi),，每瓶約分裝30mL,。

 3、水稻種子的消毒

一）將種子置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿內(nèi),，以體積分?jǐn)?shù)95％的酒精消毒1～2min。

二）取出后用無(wú)菌水沖洗2～3 遍,。

三）將種子放入25.0g/L 的次氯酸鈉溶液中輕輕搖動(dòng)后,，浸泡60min 。

四）取出后用無(wú)菌水沖洗,，將次氯酸鈉溶液充分洗凈,。

4,、接種

   在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將滅菌后的水稻種子接到誘導(dǎo)愈傷組織的固體培養(yǎng)基上,，每個(gè)培養(yǎng)瓶接5～10 粒種子,。接種完畢后用封口膜將培養(yǎng)瓶封好，放在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行黑暗培養(yǎng),。

5,、懸浮培養(yǎng)的開(kāi)始：

   當(dāng)?shù)玫接鷤M織后，將其轉(zhuǎn)人到AA 液體培養(yǎng)基中,。注意愈傷組織塊應(yīng)小于3mm . 若組織塊較大可用無(wú)菌解剖刀將其分割成小塊,。液體培養(yǎng)基分裝在250mL 的錐形瓶?jī)?nèi)．接種完畢后將瓶口用封口膜封好，把培養(yǎng)瓶放到恒溫培養(yǎng)搖床上進(jìn)行震蕩培養(yǎng),。調(diào)整搖床的旋轉(zhuǎn)速度,，使之為120r/min。培養(yǎng)溫度為26℃,，在黑暗中培養(yǎng),。

 6、懸浮培養(yǎng)物的保持

    進(jìn)行懸浮培養(yǎng)后要不斷進(jìn)行觀察,，由于培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng)與培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)物的密度及細(xì)胞生長(zhǎng)速度有關(guān),，因此當(dāng)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)物密度較大時(shí)，應(yīng)及時(shí)用無(wú)菌的吸管吸取部分培養(yǎng)物到一新的50mL 培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng),。同時(shí)還要及時(shí)淘汰一些大的組織團(tuán)塊和黃褐色的壞死組織,。一般每隔4～7d 就要繼代一次。

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