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接下來喆圖小編就來給大家講講用恒溫培養(yǎng)箱做植物細胞懸浮培養(yǎng)的基本原理，并通過實驗掌握植物細胞懸浮培養(yǎng)的方法和技術(shù),，通過實驗練習和鞏固無菌操作技術(shù),。

1、實驗所需器材如下

 超凈工作臺,、高壓蒸汽滅菌器,、恒溫培養(yǎng)箱、磁力攪拌器,、恒溫培養(yǎng)搖床,、鑷子、錐形瓶,、水稻種子

2,、實驗操作步驟配制培養(yǎng)基

   按照培養(yǎng)基配方取各種藥品，MAX后用蒸餾水定容到所需體積,。所配制的培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后用,，固體瓊脂培養(yǎng)基分裝在250mL 的錐形瓶內(nèi),，每瓶約分裝30mL,。

 3,、水稻種子的消毒

一）將種子置于無菌的培養(yǎng)皿內(nèi),，以體積分數(shù)95％的酒精消毒1～2min,。

二）取出后用無菌水沖洗2～3 遍。

三）將種子放入25.0g/L 的次氯酸鈉溶液中輕輕搖動后,，浸泡60min ,。

四）取出后用無菌水沖洗，將次氯酸鈉溶液充分洗凈,。

4,、接種

   在超凈工作臺內(nèi)，將滅菌后的水稻種子接到誘導愈傷組織的固體培養(yǎng)基上,，每個培養(yǎng)瓶接5～10 粒種子,。接種完畢后用封口膜將培養(yǎng)瓶封好，放在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進行黑暗培養(yǎng),。

5,、懸浮培養(yǎng)的開始：

   當?shù)玫接鷤M織后，將其轉(zhuǎn)人到AA 液體培養(yǎng)基中,。注意愈傷組織塊應小于3mm . 若組織塊較大可用無菌解剖刀將其分割成小塊,。液體培養(yǎng)基分裝在250mL 的錐形瓶內(nèi)．接種完畢后將瓶口用封口膜封好，把培養(yǎng)瓶放到恒溫培養(yǎng)搖床上進行震蕩培養(yǎng),。調(diào)整搖床的旋轉(zhuǎn)速度,，使之為120r/min。培養(yǎng)溫度為26℃,，在黑暗中培養(yǎng),。

 6、懸浮培養(yǎng)物的保持

    進行懸浮培養(yǎng)后要不斷進行觀察,，由于培養(yǎng)物的繼代培養(yǎng)與培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)物的密度及細胞生長速度有關(guān),，因此當發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)物密度較大時，應及時用無菌的吸管吸取部分培養(yǎng)物到一新的50mL 培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng),。同時還要及時淘汰一些大的組織團塊和黃褐色的壞死組織,。一般每隔4～7d 就要繼代一次。

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