日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

大家好今天喆圖小編給大家?guī)淼氖鞘褂?a href="http://sorrent.com.cn/st6188/product_29103166.html">培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋做細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn),。

實(shí)驗(yàn)方法原理

        細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。

實(shí)驗(yàn)材料 細(xì)胞 
儀器、耗材 微量加樣槍,、吸頭,、離心管、凍存管,、槍頭膠,、塞移液管、玻璃瓶,、紅血球計(jì)數(shù)板,、記號(hào)筆、醫(yī)用橡皮,、膏移液槍、超凈工作臺(tái),、離心機(jī),、恒溫水浴箱、冰箱,、倒置相差顯微鏡,、培養(yǎng)箱、液氮冰箱,、

1. 儀器：凈化工作臺(tái),、 離心機(jī),、恒溫水浴鍋、冰箱（4℃,、-20℃,、-70℃）、倒置相差顯微鏡,、培養(yǎng)箱,、液氮冰箱。

3. 塑料器皿： 吸頭,、槍頭,、膠塞、移液管（10ml）,、15ml離心管,、凍存管（1～2ml）。

5. 試劑：D-Hanks液,、小牛血清,、培養(yǎng)液、雙抗（青霉素,、鏈霉素）,、胰蛋白酶（0.08%）、1NHCl,、7.4%NaHCO3,、DMSO（分析純）或無色新鮮甘油。

1. 配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,。

3. 離心1 000 rpm，5 min,。

5. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1～1.5 ml。

7. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min,；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí),，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2 h ，然后放入-70℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi)。

1. 從液氮容器中取出凍存管,，直接浸入37℃水浴溫水中,，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化,。

3. 離心， 1 000 rpm,，5 min,。

5. 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng),。收起

 2. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí),，要做好防護(hù)工作，以免凍傷,。

其他

二,、慢凍程序

2. 簡(jiǎn)易程序：將冷凍管（管口要朝上）放入紗布袋內(nèi)，紗布袋系以線繩,，通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,，按每分鐘溫度下降1~2 ℃的速度，在40 min內(nèi)降至液氮表面過夜,，次晨投人液氮中,。

 三、低溫保護(hù)劑的應(yīng)用 在細(xì)胞凍存時(shí)加入溫保護(hù)劑,，能大大提高凍存效果,。 常用的低溫保護(hù)劑是DMSO，它是一種滲透性保護(hù)劑,，可迅速透入細(xì)胞,，提高胞膜對(duì)水的通透性，降低冰點(diǎn),，延緩凍結(jié)過程,，能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外，在胞外形成冰晶,，減少胞內(nèi)冰晶,，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷,。

1. 預(yù)先配制凍存液 （1）10%DMSO + 細(xì)胞生長(zhǎng)液（20%血清+基礎(chǔ)培養(yǎng)液） （2）10%甘油+ 細(xì)胞生長(zhǎng)液（20%血清+基礎(chǔ)培養(yǎng)液）

3. 加入1 ml細(xì)胞于凍存管中,，密封后標(biāo)記冷凍細(xì)胞名稱和冷凍日期,。液氮長(zhǎng)期保存,。

1. 快速解凍 凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入3中,，輕輕搖動(dòng)冷凍管,，使其在1 分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3 分鐘）,。

3. 如果細(xì)胞對(duì)冷凍保護(hù)劑特別敏感 解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑,，然后再接種到含*生長(zhǎng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。

詳情可咨詢喆圖小編,。

大家好今天喆圖小編給大家?guī)淼氖鞘褂?/span>培養(yǎng)箱,、恒溫水浴鍋做細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn),。