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土壤微生物測定方案
土壤微生物是土壤中一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱，嚴格意義上應包括細菌,、古菌,、真菌,、病毒、原生動物和顯微藻類,。其個體微小,，一般以微米或毫微米來計算，通常1克土壤中有幾億到幾百億個,，其種類和數(shù)量隨成土環(huán)境及其土層深度的不同而變化,。它們在土壤中進行氧化、硝化,、氨化,、固氮、硫化等過程,，促進土壤有機物的分解和養(yǎng)分的轉(zhuǎn)化,；那土壤內(nèi)的微生物如何測定呢，下面喆圖小編帶大家來了解一下,。
一,、培養(yǎng)方法
（1）稀釋平板涂抹法
具體操作如下：
①準確稱取 10g（到 0.001）采集的鮮土，倒入裝有 90 ml 無菌水的 500 ml 的三角瓶中,，置于往返震蕩機上（120r/min,，常溫），震蕩 20 min,，使土壤充分分散成為土壤懸液,。
②將上面的土壤懸液用無菌移液管吸取 5 ml 到 45 ml 稀釋液中，即為 10-2稀釋度,，依次按 10倍法稀釋,，制成 10-1~-~10-6稀釋度。注意:每次吸取懸液時,在稀釋液中反復吸入和吹出 3-~5 次,減少因管壁吸附而造成的誤差,并使懸液進一步分散,每個稀釋度需要更換無菌吸管吸取懸液,。)
③根據(jù)各類微生物在土壤中的數(shù)量多少選擇適當稀釋度的懸液接種,。本實驗選擇細菌的稀釋度為 10-~10-5,放線菌為 10~-10-4,真菌為 10-1~-10-3。 -3-2
④土壤懸液的接種方法:在無菌培養(yǎng)皿中倒入 15~20 ml 選擇性培養(yǎng)基,待凝固后,用 0.2 ml無菌移液槍吸取0.2 ml各稀釋度的土壤懸液,然后立即用涂抹棒將懸液均勻的涂抹于培養(yǎng)基表面,。用同一支吸管接種時,從高稀釋度開始,依次接種到低稀釋度,。
⑤接種了土壤懸液的培養(yǎng)皿,平放在超凈工作臺 20~30 min,使得菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi),然后倒置于 28~-30°C 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一定時間:細菌 1~-3 天,放線菌 10-~14 天,真菌 3~-7 天。
⑥培養(yǎng)結(jié)束后,取出培養(yǎng)皿計數(shù),。
(2)稀釋培養(yǎng)法
一系列稀釋度的制作與稀釋平板法相同,。根據(jù)各類微生物在土壤中數(shù)量的多少選擇適當?shù)南♂尪?分別接種 1 ml 稀釋液與制作好的液體培養(yǎng)基中,根據(jù)需要做 3~4 次重復,適溫培養(yǎng)。2 三大類土壤微生物培養(yǎng)基的分離三大類土壤微生物的分離采用稀釋平板涂抹法,每個菌種要求做 3 個稀釋度,每個稀釋度做3-4次重復,選取細菌和放線菌的菌落在20~-200之間的培養(yǎng)皿,、真菌的菌落在 10-~100 的培養(yǎng)皿計數(shù),并計算三次重復的平均值,。每克干土中微生物數(shù)量計算式:
每克干土中菌落數(shù)=(菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)×100%)/(濕土質(zhì)量×干土)
1, 細菌:牛rou膏蛋白胨培養(yǎng)基:牛rou膏 3g、蛋白胨 5g、瓊脂 18g,、蒸餾水 1000 ml,、pH 值 7.0-~7.2 2, 放線菌:改良高氏 1 號培養(yǎng)基:KNO3 1g,FeSO4·7H2O 0.01g,K2HPO4 0.5g,淀粉 20g,MgSO4·7H2O
0.5g、NaCl 0.5g,、瓊脂 18g,、3%重鉻酸鉀溶液 3.3ml、蒸餾水 1000ml,、pH 值 7.2~-7.4
3,真菌:馬丁氏培養(yǎng)基(虎紅瓊脂):蛋白胨 5g,、KH2PO4 1g、MgSO4 0.5g,、葡萄糖 10g,、瓊脂 18.5g、孟加拉紅 0.033g,、氯霉素 0.1g,、蒸餾水 1000ml
所有培養(yǎng)基需在濕熱滅菌鍋中121°C滅菌 20-~30min
以上土壤微生物測定方案僅供參考，詳情請咨詢上海喆圖客服,。