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原代細胞培養(yǎng)方法
原代細胞培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng),，是建立細胞系的步，其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持,，今天喆圖小編給大家?guī)碓毎囵B(yǎng)的一些技巧,，希望大家能有所收獲,！
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原代細胞培養(yǎng)
原代細胞培養(yǎng)的應(yīng)用
1、為研究生物體細胞的生長,、代謝,、繁殖提供有力的手段；
2,、為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件,；
3、服務(wù)于臨床實踐,，用于藥物篩選等,。
原代細胞培養(yǎng)之取材
取材作為原代細胞培養(yǎng)過程中的部至關(guān)重要，以下幾種取材技術(shù),，你都用過哪些方法呢,？
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兔髓核
原代細胞培養(yǎng)之分離注意事項
1、組織塊培養(yǎng)法
1）組織塊接種后的前3天,，在觀察和移動的過程中,，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動,，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起,。
2）加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來,。
3）當(dāng)細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞,，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。
4）為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上,，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上,。
2、貼壁型原代細胞
1)原代培養(yǎng)的分離細胞在初次接觸體外環(huán)境時,，它們之間會互相影響,，在這些細胞之間能產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)，使細胞彼此互相促進存活和生長,。如果接種的細胞密度過低,，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程,。如果接種的細胞密度過大,，會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代,。
2）適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細胞密度,，給培養(yǎng)的細胞提供更多的類似于在體內(nèi)時細胞之間的相互作用，會極大提高原代培養(yǎng)的細胞在體外存活率,。待細胞適應(yīng)體外環(huán)境后進行傳代培養(yǎng)時再以較低的密度接種和培養(yǎng),。
3）盡快使接種的細胞貼壁,，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h,，待細胞貼壁后，再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),。
3,、懸浮型原代細胞
1）必須保持細胞的懸浮狀態(tài)?？梢酝ㄟ^增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態(tài),，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是,，以5ml為低限度,，否則攪拌時會產(chǎn)生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快,，否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染,。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng),。給懸浮培養(yǎng)的細胞換液時要注意不要吸出細胞,。
2）能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞，其生命力一般都比較旺盛,，體外分裂增殖的速度較快,，營養(yǎng)成分消耗大，換液時間隔一般較短,。
原代細胞培養(yǎng)問題解答
1、原代細胞與細胞系有什么區(qū)別,？
根據(jù)傳統(tǒng)定義,，自組織次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞直接從組織分離，生命周期有限,，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長,。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的大生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性,。
細胞系是不斷生長,、分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造,，致使其具有無限增長的潛能,。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。
但實際上,，經(jīng)過長時間,、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后,，細胞系隨著代數(shù)的增加，細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變,。
需要指出的是,，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群,，除非細胞經(jīng)過了遺傳改造,。
2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別,？
倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍,，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出,，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù),，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長,。
3,、接收到的凍存細胞該如何處理？
收到包裝箱后,，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存,。此過程盡量快，以避免升溫,。不要將細胞儲存在-80℃,，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。
4,、凍存的細胞該如何開始培養(yǎng),？
(1) 將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛,。
(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化,。
(3) 將凍存管立即從水浴中拿出,，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境,。
(4) 用70％的酒精沖洗凍存管,，然后擦去多余酒精。
(5) 打開蓋子,，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意,，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出,，這是正?，F(xiàn)象）,。
(6) 用多聚賴氨酸（或參照說明書）包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞,。
(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子,。
(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃,，5%CO2，95%空氣）CO2培養(yǎng)箱
(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基,，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞,。
5、細胞培養(yǎng)過程中,，多久更換一次培養(yǎng)基,？
這取決于細胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基,，許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一,，周三，周五更換培養(yǎng)基,。
注意：凍存細胞復(fù)蘇后,，在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞,。
6,、我能擴增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細胞嗎？
這取決于細胞的類型,。一些細胞類型像神經(jīng)細胞,，神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長緩慢的上皮細胞，不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存,。其它的細胞類型像成纖維細胞,、星形細胞、腎系膜細胞,、星形膠質(zhì)細胞等等，可以擴增培養(yǎng)和再次凍存,。
然而,，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細胞生長性能的改變。
以上就是喆圖小編簡單介紹的培養(yǎng)方法,，希望能給大家?guī)韼椭?/p>