Merck TR-1003-G 聚乙烯感染/轉(zhuǎn)染試劑
?默克集團(tuán)（Merck）?是一家領(lǐng)xian的科技公司,，專注于醫(yī)藥健康,、生命科學(xué)和電子科技三大領(lǐng)域。公司成立于1668年,，總部位于德國(guó)達(dá)姆施塔特,。默克集團(tuán)的業(yè)務(wù)范圍廣泛，包括醫(yī)藥健康,、生命科學(xué)產(chǎn)品的研發(fā),、生產(chǎn)和銷售，以及電子科技解決方案的提供,。
Merck TR-1003-G 聚乙烯感染/轉(zhuǎn)染試劑 1ml,，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
產(chǎn)品品牌：Merck
產(chǎn)品貨號(hào)：TR-1003-G
產(chǎn)品名稱：聚乙烯感染/轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品規(guī)格：1ml
Merck TR-1003-G 聚乙烯感染/轉(zhuǎn)染試劑 1ml，產(chǎn)品說(shuō)明：
應(yīng)用
聚凝胺是一種陽(yáng)離子聚合物,，可以大大提高逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的效率,。 它起到中和病毒體與細(xì)胞表面之間電荷排斥的作用，從而提高感染效率,。 逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的效率在某些細(xì)胞中顯著提高了 100 到 1,000 倍,，這是因?yàn)樵诟腥具^(guò)程中加入了聚凝胺。 含有 DMSO 的聚凝胺儲(chǔ)液還用于介導(dǎo) DNA 轉(zhuǎn)移到多種細(xì)胞類型中,，例如 CHO,、雞胚成纖維細(xì)胞,、NINH-3T3 和髓樣細(xì)胞。
方法：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染
重組逆轉(zhuǎn)錄病毒儲(chǔ)液是通過(guò)將 5ml 生長(zhǎng)培養(yǎng)基（含 5％ 血清）添加接近匯合的轉(zhuǎn)染的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞單層細(xì)胞的 100mm 平板中來(lái)制備的,。 24 小時(shí)后,，去除培養(yǎng)基，并通過(guò) 0.45um 過(guò)濾器過(guò)濾,。
將要感染該重組逆轉(zhuǎn)錄病毒儲(chǔ)液的細(xì)胞以每個(gè) 100mm 平板 500,000 個(gè)細(xì)胞的量接種在 10ml wan全培養(yǎng)基中,。
24 小時(shí)后，去除細(xì)胞的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。 用 2ml 的病毒上清液（或?qū)⒉《緝?chǔ)液稀釋至 2ml）感染細(xì)胞,，每毫升添加 5ug 至 10ug 的聚凝胺（最終濃度），在 37°C 下孵育細(xì)胞 3 到 6 小時(shí),。
加入 8 ml wan全培養(yǎng)基,。 感染三天后，將細(xì)胞按 1：5 的比例分進(jìn)選擇培養(yǎng)基,。
方法：轉(zhuǎn)染
將細(xì)胞鋪在wan全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,，約有 50％ 匯合。
鋪板后 18 至 24 小時(shí),，立即使用以下方法制備 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液：
注意：必須按照正確的順序添加每個(gè)組件,。
1：wan全生長(zhǎng)培養(yǎng)基（60mm 平板，2ml,；
100mm 平板,，3ml），加熱至 37°C,。
2：質(zhì)粒 DNA,，10ng 至 10ug。 輕輕混合,。
3：聚凝胺的最終濃度為每毫升 5ug 至 10ug,。 輕輕混合
從平板中去除培養(yǎng)基，并將 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液添加到細(xì)胞中,。 讓細(xì)胞在 37°C 下孵育 6 到 20 小時(shí),，前 6 個(gè)小時(shí)大約每 1.5 個(gè)小時(shí)輕輕搖動(dòng)一次。
去除 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液,，并用 DMSO 儲(chǔ)液輕輕覆蓋細(xì)胞（在 1X HBSS 中的 15％ DMSO：專門培養(yǎng)基（貨號(hào) S-051-D）每個(gè) 60 mm 平板 3 ml,，每個(gè) 100 mm 平板 4 ml。 手動(dòng)搖動(dòng)培養(yǎng)皿 10 秒鐘,，使溶液均勻分布,，然后將細(xì)胞置于 37°C 下溫育 4 分鐘。
立即去除 DMSO 儲(chǔ)液,，并用wan全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕沖洗細(xì)胞兩次,，每個(gè) 60 mm 培養(yǎng)皿每次洗滌用 5 ml,，每個(gè) 100 mm 培養(yǎng)皿每次洗滌用 10 ml
將wan全生長(zhǎng)培養(yǎng)基添加到細(xì)胞中。
若要獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子,，則去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，并將細(xì)胞按 1：5 比例分進(jìn)選擇培養(yǎng)基。
若要瞬時(shí)表達(dá),，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基并添加新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。 24 至 72 小時(shí)后收獲細(xì)胞和/或培養(yǎng)基。
提供的試劑通過(guò)0.2μm膜過(guò)濾并用無(wú)菌H2O水化,。
外形
每毫升無(wú)菌超純水溶解 10mg 聚乙烯,。
儲(chǔ)存及穩(wěn)定性
在 -20°C 可保存長(zhǎng)達(dá) 2 年。
免責(zé)聲明
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產(chǎn)品訂購(gòu)信息：
TR-1003-G 聚乙烯感染/轉(zhuǎn)染試劑 1ml
