Qiagen 12381 無(wú)內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒

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Qiagen 無(wú)內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

QIAGEN作為創(chuàng)新市場(chǎng)和技術(shù)的領(lǐng)dao者,，憑借強(qiáng)大的樣本制備和分析技術(shù),，實(shí)現(xiàn)各種生物樣本內(nèi)容物的高品質(zhì)純化、分析,。我們致力于幫助客戶(hù)在生命科學(xué)研究,、應(yīng)用檢測(cè)、制藥,、和分子診斷領(lǐng)域獲得成功和突破性進(jìn)展,。由此讓生活的改善成為可能。我們秉承市場(chǎng),、客戶(hù),、病患至上的理念，不斷推進(jìn)多領(lǐng)域的創(chuàng)新和發(fā)展,，充分發(fā)揮我們的樣本制備和分析技術(shù)專(zhuān)長(zhǎng),。

Qiagen 12381 無(wú)內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒 EndoFree Plasmid Mega Kit  5T，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：Qiagen

產(chǎn)品貨號(hào)：12381

產(chǎn)品名稱(chēng)：無(wú)內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：5T

Qiagen 無(wú)內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒-常備現(xiàn)貨 

Qiagen 12381 無(wú)內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒 EndoFree Plasmid Mega Kit  5T,，產(chǎn)品說(shuō)明：

特征

達(dá)到小于 0.1 EU/μg DNA

綜合內(nèi)毒素去除

高拷貝質(zhì)粒 DNA 的高產(chǎn)量

LyseBlue 可實(shí)現(xiàn)最佳裂解和最大 DNA 產(chǎn)量

產(chǎn)品詳情

無(wú)內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒提供基于陰離子交換的快速無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 純化,。QIA過(guò)濾器濾芯可通過(guò)過(guò)濾快速清除裂解物。純化的DNA純度超過(guò)2 x CsCl梯度離心獲得的純度,，適用于高級(jí)轉(zhuǎn)染級(jí)應(yīng)用,。EndoFree質(zhì)粒緩沖液組合可用于制備10 mega或5 giga轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒或cosmid DNA制劑,。

Performance

EndoFree質(zhì)粒試劑盒將高效的內(nèi)毒素去除步驟集成到質(zhì)粒純化程序中——無(wú)需額外的提取或親和柱來(lái)去除脂多糖,。細(xì)菌裂解物通過(guò)QIAfilterMega-Giga或Maxi濾芯過(guò)濾進(jìn)行清除，質(zhì)粒DNA在含有陰離子交換樹(shù)脂的重力流QIAGENjian端上純化,。從培養(yǎng)物中純化 DNA 可獲得高達(dá) 10 mg （giga）,、2.5 mg（兆）和 500 μg（最大）的純化 DNA（培養(yǎng)體積取決于質(zhì)粒拷貝數(shù),、插入片段大小,、宿主菌株和培養(yǎng)基）。純化的DNA不含內(nèi)毒素（<0.1 EU/μg DNA）,。

對(duì)于低拷貝質(zhì)粒和cosmid的純化,，由于所需的培養(yǎng)體積大且QIAfilter超千兆質(zhì)粒試劑盒的容量有限，因此EndoFree質(zhì)粒Mega試劑盒是比EndoFree Giga質(zhì)粒試劑盒更好的選擇,。

無(wú)內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒可去除裂解步驟中釋放的細(xì)菌內(nèi)毒素,，并影響DNA轉(zhuǎn)染到原代細(xì)胞和敏感培養(yǎng)細(xì)胞中,。從EndoFree質(zhì)粒試劑盒獲得的無(wú)內(nèi)毒素DNA非常適合在轉(zhuǎn)染中獲得可重復(fù)且可靠的結(jié)果,。QIAGEN超純無(wú)內(nèi)毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應(yīng)用,。

*原代兔胃壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染用按所示方法制備的pEGFP-N2（CLONTECH）。使用Effectene轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。數(shù)據(jù)表示表達(dá)GFP的細(xì)胞百分比,，通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)染后48小時(shí)的綠色熒光細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行評(píng)分來(lái)確定。每種純化方法的轉(zhuǎn)染效率代表來(lái)自6種以上不同DNA制備的9至2個(gè)重復(fù)培養(yǎng)皿的平均效率,。（數(shù)據(jù)由美國(guó)佐治亞州奧古斯塔佐治亞醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)和遺傳學(xué)系 C. Chew 和 J. Parente 提供,。

Principle

純化質(zhì)粒DNA中的內(nèi)毒素污染水平取決于所使用的純化方法。二氧化硅漿液純化的DNA表現(xiàn)出ji高的內(nèi)毒素水平,。QIAGEN,、QIAfilter和HiSpeed質(zhì)粒試劑盒以及2x CsCl超速離心可產(chǎn)生非常純的DNA，內(nèi)毒素水平相對(duì)較低,。EndoFree 質(zhì)粒試劑盒包括一個(gè)集成的內(nèi)毒素去除步驟,，可產(chǎn)生含有 <0.1 EU/μg 質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)粒 DNA。

QIAfilter試劑盒以QIAfilter,、HiSpeed和EndoFree質(zhì)粒試劑盒形式提供,，是特殊的過(guò)濾裝置，旨在取代細(xì)菌細(xì)胞堿性裂解后的離心,。QIAfilter濾芯可wan全去除SDS沉淀物并清除細(xì)菌裂解物,，所需時(shí)間僅為離心所需時(shí)間的一小部分，從而將質(zhì)粒純化時(shí)間縮短多達(dá)1小時(shí),。QIAfilter超級(jí)千兆濾芯在室內(nèi)真空下運(yùn)行,，以最小的努力有效地清除大量細(xì)菌裂解物（請(qǐng)注意，瓶子不包括在套件中）,。QIAfilter Maxi 濾芯具有注射器形式,，通過(guò)將液體推入過(guò)濾器，可在幾秒鐘內(nèi)清除裂解物,。

QIAGEN-tips中du特的陰離子交換樹(shù)脂專(zhuān)為核酸純化而開(kāi)發(fā),。其zhuo越的分離特性使DNA純度等于或優(yōu)于連續(xù)兩輪CsCl梯度離心獲得的DNA純度。預(yù)包裝的QIAGEN吸頭通過(guò)重力流運(yùn)行,，永bu干涸,，最大限度地減少了質(zhì)粒制備所需的手動(dòng)操作時(shí)間。整個(gè)QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)避免使用苯fen,、氯仿,、溴化乙錠和氯化銫等有毒物質(zhì)，最大限度地減少對(duì)用戶(hù)和環(huán)境的危害,。

內(nèi)毒素,，也稱(chēng)為脂多糖或LPS，是大腸桿菌等革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞膜成分。內(nèi)毒素在質(zhì)粒純化的裂解步驟中釋放,，并顯著降低內(nèi)毒素敏感細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率,。此外，內(nèi)毒素可以通過(guò)與DNA競(jìng)爭(zhēng)“游離"轉(zhuǎn)染試劑來(lái)影響轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中質(zhì)粒DNA的攝取,。內(nèi)毒素還會(huì)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞中免疫應(yīng)答的非特異性激活,，從而導(dǎo)致對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤解。這些反應(yīng)包括誘導(dǎo)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的合成,，如IL-1和前列腺素,。總體而言,，內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)設(shè)置中不可控的變量,，會(huì)影響結(jié)果和結(jié)果的可重復(fù)性，使其難以比較和解釋,。在基因治療研究中,，內(nèi)毒素可以通過(guò)引起內(nèi)毒性休克綜合征和補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)的激活來(lái)干擾。

Procedure

細(xì)菌細(xì)胞在堿性條件下裂解,，并使用QIAfilter濾芯清除粗裂解物,。在此階段，將內(nèi)毒素去除緩沖液添加到過(guò)濾后的裂解物中,，在冰上孵育,。然后將澄清的裂解物加載到陰離子交換jian端，質(zhì)粒DNA在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下選擇性結(jié)合,。通過(guò)中鹽洗滌除去RNA,、蛋白質(zhì)、代謝物和其他低分子量雜質(zhì),，并在高鹽緩沖液中洗脫超純質(zhì)粒DNA,。DNA通過(guò)異丙醇沉淀濃縮和脫鹽，并通過(guò)離心收集,。

Applications

使用無(wú)內(nèi)切質(zhì)粒試劑盒純化的DNA適用于任何敏感應(yīng)用,，包括：

轉(zhuǎn)染，包括原代細(xì)胞,、敏感細(xì)胞和懸浮細(xì)胞

基因治療研究

基因沉默

注射

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Qiagen 12381 無(wú)內(nèi)毒素宏量質(zhì)粒提取試劑盒 EndoFree Plasmid Mega Kit  5T