AAT Bioquest 23000/23002 Cell Meter™自噬測(cè)定試劑盒*藍(lán)色/綠色熒光*

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AAT Bioquest 自噬測(cè)定試劑盒藍(lán)色/綠色熒光-常備現(xiàn)貨

美國(guó) AAT Bioquest Inc.(前身是 ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究,、診斷研發(fā)及藥物開(kāi)發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司,。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域,，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù),。AATBioquest 的產(chǎn)品幫助 quan shi jie 的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué),，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域,。AAT Bioquest 會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品,，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  23000  Cell Meter™ 自噬檢測(cè)試劑盒 *藍(lán)色熒光*  200 Tests

AAT Bioquest  23002  Cell Meter™ 自噬檢測(cè)試劑盒 *綠色熒光*  200 Tests

AAT Bioquest 自噬測(cè)定試劑盒藍(lán)色/綠色熒光-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest  23000  Cell Meter™ 自噬檢測(cè)試劑盒 *藍(lán)色熒光*  200 Tests,，產(chǎn)品說(shuō)明：

自噬是一種進(jìn)化上保守的降解過(guò)程,，它靶向長(zhǎng)壽命的蛋白質(zhì)、細(xì)胞器和其他細(xì)胞質(zhì)成分,，通過(guò)溶酶體途徑進(jìn)行降解,。自噬途徑與泛素-蛋白酶體途徑的作用相輔相成，泛素-蛋白酶體途徑通常降解短壽命蛋白質(zhì),。自噬途徑的激活是多種細(xì)胞作用所必需的,，包括饑餓期間的存活,、細(xì)胞內(nèi)成分的清除、發(fā)育和免疫,。在沒(méi)有壓力的情況下,，自噬具有內(nèi)務(wù)管理功能，去除受損的細(xì)胞器和細(xì)胞成分,，防止細(xì)胞毒性作用,。自噬的減少和缺陷與多種疾病有關(guān)，例如亨廷頓舞蹈癥,、阿爾茨海默氏癥和帕金森氏癥,。在癌癥發(fā)展方面，自噬似乎起著多種作用,。某些自噬蛋白（如Beclin-1和Bif-1）的表達(dá)減少或缺失會(huì)增加小鼠的腫瘤易感性,，而這些蛋白的過(guò)表達(dá)可以抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。然而,，自噬對(duì)于實(shí)體瘤營(yíng)養(yǎng)貧乏和缺氧核心內(nèi)癌細(xì)胞的存活至關(guān)重要,。細(xì)胞計(jì)™自噬試劑盒采用自噬藍(lán)™作為特定的自噬體標(biāo)記物來(lái)分析自噬的活性,。該測(cè)定針對(duì)直接檢測(cè)分離和附著細(xì)胞中的自噬進(jìn)行了優(yōu)化,。該試劑盒提供了檢測(cè)方案的所有基本組件。細(xì)胞計(jì)™自噬試劑盒適用于熒光顯微鏡,，熒光酶標(biāo)儀,。

組件

組分A：500X Autophagy Blue™—1 瓶 （50 μL）

組分B：染色緩沖液—1 瓶 （25 mL）

組分C：洗滌緩沖液—1 瓶 （100 mL）

1.    用1 - 2 × 10的測(cè)試化合物制備細(xì)胞4細(xì)胞/孔

2.    添加自噬藍(lán)™工作溶液

3.    在 37°C 下孵育 15 - 60 分鐘

4.    用洗滌緩沖液洗滌細(xì)胞

5.    監(jiān)測(cè)Ex / Em= 330/520 nm（截止= 475 nm）處的熒光增加，帶有DAPI濾光片組的熒光顯微鏡

重要說(shuō)明：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前,，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊薪M分,。

工作溶液的制備

將 20 μL 500X 自噬藍(lán)（組分 A）加入 10 mL 染色緩沖液（組分 B）中，充分混合制成自噬藍(lán)™™工作溶液,。避光,。注意：20 μL 500X 自噬藍(lán)™（組分 A）足以用于一個(gè) 96 孔板。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

1.    根據(jù)您的特定誘導(dǎo)方案將細(xì)胞培養(yǎng)至 zui shi he 自噬誘導(dǎo)的密度（約 1 - 2 x 104細(xì)胞/孔/96孔板）,。同時(shí),，對(duì)于每個(gè)標(biāo)記條件，以與誘導(dǎo)群體相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)陰性對(duì)照細(xì)胞群,。

2.    取出介質(zhì),。

3.    向每個(gè)孔中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）自噬藍(lán)™工作溶液。

4.    將細(xì)胞在 37°C,、5% CO 中孵育2培養(yǎng)箱15至60分鐘,。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所使用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間,。

5.    用洗滌緩沖液（組分C）洗滌細(xì)胞3-4次,，然后向每個(gè)孔中加入100μL洗滌緩沖液（組分C）,。注意：建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間，以便在細(xì)胞似乎沒(méi)有充分染色的情況下讓染料積聚,。

6.    使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 330/520 nm（截止= 475 nm）下監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度,，帶有DAPI濾光片組的熒光顯微鏡。

AAT Bioquest  23002  Cell Meter™ 自噬檢測(cè)試劑盒 *綠色熒光*  200 Tests,，產(chǎn)品說(shuō)明：

該 Cell Meter™ 自噬試劑盒采用 Autophagy Green™ 作為特異性自噬體標(biāo)記物來(lái)分析自噬活性,。該檢測(cè)經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可直接檢測(cè)分離細(xì)胞和附著細(xì)胞中的自噬,。該試劑盒為檢測(cè)方案提供了所有必需的組分,。Cell Meter™ Autophagy Kit適用于熒光顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀和流式細(xì)胞儀,。Autophagy Green™ 有很大的 Stokes 位移,。自噬是一種進(jìn)化上保守的降解過(guò)程，它靶向長(zhǎng)壽命的蛋白質(zhì),、細(xì)胞器和其他細(xì)胞質(zhì)成分,，通過(guò)溶酶體途徑進(jìn)行降解。自噬途徑與泛素-蛋白酶體途徑的作用互補(bǔ),，泛素-蛋白酶體途徑通常降解短壽命蛋白質(zhì),。自噬途徑的激活是多種細(xì)胞作用所必需的，包括饑餓期間的生存,、細(xì)胞內(nèi)成分的清除,、發(fā)育和免疫。在沒(méi)有壓力的情況下,，自噬具有管家功能,，去除受損的細(xì)胞器和細(xì)胞成分，防止細(xì)胞毒性作用,。自噬的減少和缺陷與多種疾病有關(guān),，例如亨廷頓病、阿爾茨海默病和帕金森病,。在癌癥發(fā)展方面,，自噬似乎起著多種作用。某些自噬蛋白（如 Beclin-1 和 Bif-1）的表達(dá)減少或缺失會(huì)增加小鼠的腫瘤易感性,，而這些蛋白的過(guò)表達(dá)會(huì)抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng),。然而，自噬對(duì)于實(shí)體瘤營(yíng)養(yǎng)不良和缺氧核心內(nèi)癌細(xì)胞的存活至關(guān)重要,。

流式細(xì)胞儀

興奮：488 nm 激光器

排放：530/30 nm 濾光片

儀器規(guī)格：FITC國(guó)際渠道

熒光顯微鏡

興奮：FITC熒光過(guò)濾器

排放：FITC熒光過(guò)濾器

推薦盤(pán)子：黑色墻壁/透明底部

熒光酶標(biāo)儀

興奮：485海里

排放：530海里

近路：515海里

推薦盤(pán)子：黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格：底部讀取模式

組件

組分 A：500X 自噬綠色™—1 瓶 （50 μL）

組分 B：染色緩沖液—1 瓶 （25 mL）

組分C：洗滌緩沖液—1 瓶 （100 mL）

使用測(cè)試化合物制備細(xì)胞

添加自噬綠色™工作溶液

在 37°C 孵育 15 - 60 分鐘

使用洗滌緩沖液洗滌細(xì)胞

監(jiān)測(cè)Ex / Em = 485 / 530nm（截止= 515nm）處的熒光增加,，熒光顯微鏡與FITC濾光片組或流式細(xì)胞儀與530 / 30nm濾光片（FITC通道）

重要提示：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有組分。

工作溶液的制備

將 20 μL Autophagy Green™（組分 A）加入 10 mL 染色緩沖液（組分 B）中,，充分混合以制備 Autophagy Green™ 工作溶液,。避光。注意：20 μL 500X 自噬綠™液（組分 A）足以用于一個(gè) 96 孔板,。注意：將未使用的 500X Autophagy Green™ 等分并儲(chǔ)存在 < -20oC 下,。 避光，避免反復(fù)凍融循環(huán),。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

1.    根據(jù)您的特定誘導(dǎo)方案（約 1-2 × 104細(xì)胞/孔/96孔板）,。同時(shí)，在每種標(biāo)記條件下,，以與誘導(dǎo)細(xì)胞群相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)陰性對(duì)照細(xì)胞群,。

2.    取出培養(yǎng)基。

3.    向每個(gè)孔中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 Autophagy Green™ 工作溶液,。

4.    將細(xì)胞在 37°C,、5% CO 中孵育2孵育 15 至 60 分鐘。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度,。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間,。

5.    用洗滌緩沖液（組分C）洗滌細(xì)胞3-4次，然后向每個(gè)孔中加入100μL洗滌緩沖液（組分C）,。注意：如果細(xì)胞看起來(lái)沒(méi)有充分染色,，建議增加標(biāo)記濃度或孵育時(shí)間，以使染料積累,。

6.    使用Ex / Em = 485 / 530nm（截止= 515nm）的熒光酶標(biāo)儀,，帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡或帶有530 / 30 nm濾光片（FITC通道）的流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

AAT Bioquest  23000  Cell Meter™ 自噬檢測(cè)試劑盒 *藍(lán)色熒光*  200 Tests

AAT Bioquest  23002  Cell Meter™ 自噬檢測(cè)試劑盒 *綠色熒光*  200 Tests