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純度 | 99% | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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規(guī)格 | 50T | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
主要用途 | 科研實驗 |
本產(chǎn)品僅供科研,,不得做其它用途
更多產(chǎn)品詳細信息可免費向客服索取訂購,。
本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,,用戶只需要提供樣品DNA模板,。
2. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品,。
3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設計,不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應,。
4. PCR mix中含上樣染料,,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應,。
6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗,,不能用于定量。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研
犬冠狀熒光PCR檢測試劑盒樣品的制備
【試劑盒組成】
序號 | 組成 | 50T/盒 |
1 | RT-PCR反應液 | 875 μL×1管 |
2 | 混合酶液 | 125 μL×1管 |
3 | 陽性對照 | 40 μL×1管 |
4 | C 陰性對照 | 40 μL×1管 |
5 | 說明書 | 1份 |
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,,避免反復凍融,,有效期12個月。
【適用儀器】 ABI7500,、羅氏 96/480,、安捷倫、伯樂,、國產(chǎn)博日,、宏石等各種熒光定量 PCR 儀。
【樣本要求】
1.血液或血清樣品:使用無菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢,。
2.肌肉或內(nèi)臟樣品:取少量樣品(2~3克)于研缽或勻漿器中研磨,,然后將研磨勻漿轉入無菌離心管中,3000rpm/min 離心10分鐘取上清待檢,。
3.應避免標本間交叉污染,。
4.標本收集后可立即檢測;若不能立即檢測,,可置于2~8℃冷藏過夜保存;如需長期保存,,標本應凍存于-80℃以下,,避免反復凍融,。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例),。
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照,。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,,5,,4,3,,2,,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,,最好用帶芯槍頭,,下同。
3. 在 6 號管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,,在 5 號管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,,在 4 號管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用,。
檢驗方法的局限性】
1.當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒檢出可能會發(fā)生假陰性的結果,。
2.被檢樣本在采集、運輸,、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結果,。
3.樣本在采集,、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,,則容易得到假陽性結果,。
【注意事項】
1.使用本試劑盒的實驗室,應嚴格按照國家有關部分頒布的有關基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理,;
2.為避免RNA降解,,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測,;樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理,;
3.各區(qū)域物品均為專用,不得交叉使用,,以免污染,;檢測結束后,應立即對工作臺清潔,;
4.吸取反應液時,,應盡量避免產(chǎn)生氣泡;上 PCR 儀前,,應注意檢查各反應管是否蓋緊,,以免液體蒸發(fā)造成結果不準確;
5.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,,并應瞬時離心,;
6.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),并單獨存放,;
7.為防止熒光干擾,,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記,;
8.檢測過程中使用過的吸頭,,應直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內(nèi),檢測結束的PCR 反應管,,切忌開蓋,,并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄;工作臺及各種實驗用品應定期用 10%次氯酸,、75%酒精或紫外燈進行消毒,;
9.儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用,;并在有效期內(nèi)使用,。
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