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本產(chǎn)品僅供科研,，不得做其它用途

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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用,，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對(duì)照,，便于區(qū)分假陰性樣品,。

3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),，不會(huì)跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng),。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳,。

5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng),。

6. 本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn)，不能用于定量,。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研

（通用型）熒光PCR檢測(cè)試劑盒樣品的制備　

【試劑盒組成】

【儲(chǔ)存條件及有效期】避光-20℃以下保存,，避免反復(fù)凍融,，有效期12個(gè)月。

【適用儀器】 ABI7500,、羅氏 96/480,、安捷倫、伯樂,、國產(chǎn)博日、宏石等各種熒光定量 PCR 儀,。

【樣本要求】

1.血液或血清樣品：使用無菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢,。

2.肌肉或內(nèi)臟樣品：取少量樣品（2～3克）于研缽或勻漿器中研磨，然后將研磨勻漿轉(zhuǎn)入無菌離心管中,，3000rpm/min 離心10分鐘取上清待檢,。

3.應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。

4.標(biāo)本收集后可立即檢測(cè),；若不能立即檢測(cè),，可置于2～8℃冷藏過夜保存；如需長期保存,，標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下,，避免反復(fù)凍融。

使用方法：

一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）,。

由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對(duì)照,。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6,，5,，4，3,，2,，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,，最好用帶芯槍頭,，下同。

3. 在 6 號(hào)管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,，在 5 號(hào)管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

5. 換槍頭，在 4 號(hào)管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

檢驗(yàn)方法的局限性】

1.當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒檢出可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果,。

2.被檢樣本在采集,、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果,。

3.樣本在采集,、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,，則容易得到假陽性結(jié)果,。

【注意事項(xiàng)】

1.使用本試劑盒的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范進(jìn)行管理,；

2.為避免RNA降解,，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè),；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理,；

3.各區(qū)域物品均為專用，不得交叉使用,，以免污染,；檢測(cè)結(jié)束后，應(yīng)立即對(duì)工作臺(tái)清潔,；

4.吸取反應(yīng)液時(shí),，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡；上 PCR 儀前,，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確；

5.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時(shí)離心,；

6.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),，并單獨(dú)存放；

7.為防止熒光干擾,，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記；

8.檢測(cè)過程中使用過的吸頭,，應(yīng)直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內(nèi),，檢測(cè)結(jié)束的PCR 反應(yīng)管，切忌開蓋,，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄,；工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒,；

9.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用,；并在有效期內(nèi)使用,。

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