目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>PCR試劑盒>>普通PCR檢測試劑盒>> 古典豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒
| 純度 | 99% | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 50T | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 科研實驗 |
本產(chǎn)品僅供科研，不得做其它用途
更多產(chǎn)品詳細信息可免費向客服索取訂購,。
本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板,。
2. 提供陽性對照,，便于區(qū)分假陰性樣品。
3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高,，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,，不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應。
4. PCR mix中含上樣染料,，PCR后可以直接上樣電泳,。
5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應。
6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗,，不能用于定量,。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研
古典豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒樣品的制備
1. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取反應,，多出的兩個中一個是 PC（樣品制備陽性對照）,，一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 牛乳頭瘤病毒 PCR 陽性對照（1×10E6 拷貝/μL,，本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）,?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡?/p>
2. 用自選方法純化上述 N+2 個樣品的 DNA,。本試劑盒跟市場上大多數(shù)細菌提取試劑盒兼容,。
電泳分析
1. 取 5-10uL 擴增產(chǎn)物進行常規(guī)瓊脂糖電泳,，檢測擴增效果，由于擴增產(chǎn)物較短,，建議用 1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠,。
2. 陽性樣品預期得到的擴增產(chǎn)物長度為 200bp 左右。如果兩個陰性對照（樣品制備陰性對照或 PCR 陰性對照）有此擴增產(chǎn)物,，說明環(huán)境污染,，則整個實驗無效，不需要分析實驗結(jié)果,。
3. 如果所有樣品和 PCR 陽性對照均無此擴增產(chǎn)物,，則說明有系統(tǒng)性的問題（試劑、設(shè)備,、程序,、操作等），需要重復并排查原因,。
4. 如果沒有上述兩種情況,，則實驗有效，可以分析樣品的擴增結(jié)果,。N+2 個樣品中有擴增產(chǎn)物的判定為陽性,，無則判定為陰性。
使用方法：
一,、稀釋標準曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。
由于標準品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,，分別為 6,，5，4,，3,，2，1,。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,，最好用帶芯槍頭，下同,。
3. 在 6 號管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用,。
4. 換槍頭,，在 5 號管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用。
5. 換槍頭,，在 4 號管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品,。放冰上待用,。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用,。
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