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本產(chǎn)品僅供科研,，不得做其它用途

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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒,，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用,，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽(yáng)性對(duì)照,，便于區(qū)分假陰性樣品,。

3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),，不會(huì)跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng),。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳,。

5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng),。

6. 本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn)，不能用于定量,。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研

香菇源性成分PCR試劑盒樣品的制備　

1. 如果有N個(gè)樣品,，必須設(shè)置N+2個(gè)提取反應(yīng)，多出的兩個(gè)中一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）,?？梢杂?10μL 牛乳頭瘤病毒 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E6 拷貝/μL，本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照（加水后其總體積跟樣品一樣,，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）,。可以用水作為制備的陰性對(duì)照,。

2. 用自選方法純化上述 N+2 個(gè)樣品的 DNA,。本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌提取試劑盒兼容。

電泳分析　

1. 取 5-10uL 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)瓊脂糖電泳,，檢測(cè)擴(kuò)增效果,，由于擴(kuò)增產(chǎn)物較短，建議用 1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠,。

2. 陽(yáng)性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為 200bp 左右,。如果兩個(gè)陰性對(duì)照（樣品制備陰性對(duì)照或 PCR 陰性對(duì)照）有此擴(kuò)增產(chǎn)物，說(shuō)明環(huán)境污染,，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效,，不需要分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3. 如果所有樣品和 PCR 陽(yáng)性對(duì)照均無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物,，則說(shuō)明有系統(tǒng)性的問題（試劑,、設(shè)備、程序,、操作等）,，需要重復(fù)并排查原因。

4. 如果沒有上述兩種情況,，則實(shí)驗(yàn)有效,，可以分析樣品的擴(kuò)增結(jié)果。N+2 個(gè)樣品中有擴(kuò)增產(chǎn)物的判定為陽(yáng)性,，無(wú)則判定為陰性,。

使用方法：

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）,。

由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照,。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 6,，5，4,，3,，2，1,。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,，最好用帶芯槍頭，下同,。

3. 在 6 號(hào)管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

4. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。

5. 換槍頭,，在 4 號(hào)管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。

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