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細胞名稱：P30/OHK ATCC細胞

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1,、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜，放入37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2,、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次,；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代,，zui后放入37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后,，觀察培養(yǎng)結果,，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3,、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次,；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞,，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過夜,，24h后轉入液氮中進行長期保存,。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4,、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）,，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min,；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸,，接種25cm2培養(yǎng)瓶,，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

1,、倍增和代數有什么區(qū)別,？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數加倍，通常是指細胞指數或對數生長期,。代數是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出,，傳代培養(yǎng)過程的次數，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長,。

2,、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后,，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存,。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃,，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害,。

3、有多少經驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng),？推薦有經驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作,，如果有經驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室,，我們會為你提供幫助,。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務告知書

1）細胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標準是什么,？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失,、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā),；

2. 細胞污染問題,，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果,，核實后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后,，絕大多數細胞未存活,，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā),；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,，出現(xiàn)污染，重發(fā),；

5. 細胞活性問題,，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,，核實后予重發(fā),；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的,，視為產品合格,。4-7天內出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的,，由技術人員判定為我方責任的,，重發(fā)。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā),。

二）細胞出現(xiàn)問題,，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染,，不重發(fā),；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā),；

5. 細胞培養(yǎng)時經其它處理的，不重發(fā),；

6. 細胞收到2天內,，未告知，不重發(fā),；

7. 視具體情況而定,。

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