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產(chǎn)品名稱：植物天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)ELISA試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中指標(biāo)水平,。用純化的指標(biāo)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入指標(biāo),，再與HRP標(biāo)記的-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過 洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的指標(biāo)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中指標(biāo)濃度,。

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

植物天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)ELISA試劑盒操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

ELISA的檢測目的是為了實驗提供準(zhǔn)確的實驗依據(jù),，為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性,，在實驗過程中必須堅持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃

注意事項

1,、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類,，如果要做復(fù)孔，標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測種類x2
2、樣本收集后若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測可保存于2-8°C,，若不及時檢測,，請進(jìn)行分裝，凍存于-20°或-80°C,，避免反復(fù)凍融
3、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍,，建議實驗前通過相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測物的濃度并通過預(yù)實驗確定樣本,。
4、血清標(biāo)本采集是應(yīng)注意避免溶血,，紅細(xì)胞溶解是會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色
5、為了保證尿液檢測的準(zhǔn)確性,，必須正確收集尿液標(biāo)本和保存,，收集尿液的容器必須要清潔干燥， 使用一次性的容器,，避免因用藥并清潔不到而造成的污染,，尿液樣本必須新鮮，留取后,，應(yīng)及時檢測或保存
6,、標(biāo)本宜在新鮮是檢測如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng),。如在冰箱中保存過久，其中可能發(fā)生聚合,，間接法ELISA中樂視本底加深,，
7、反復(fù)凍融會使蛋白效價降低,，所以待測樣本如需多次檢測,，宜少量分裝凍存

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

1．試劑盒保存：；2-8℃,。

2．有效期：6個月更多產(chǎn)品詳情聯(lián)系我們

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