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Yeast Nucleoside diphosphokinase試劑催化腺苷三磷酸（ATP）和核苷二磷酸（NDP）之間高能磷酸基團(tuán)的

轉(zhuǎn)移，在體內(nèi)負(fù)責(zé)合成除ATP以外的其它核糖核苷酸的生成,。由二核糖核苷酸生成三核糖核苷酸：(d)XDP+(d)YTP?(d)XTP+(d)

YDP,。另外,該酶還具有NDP激酶活性和蛋白磷酸轉(zhuǎn)移酶活性,并參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。該蛋白來源于S. cerevisiae,，

通過重組表達(dá)而得,。

組分

組分名稱數(shù)量

Yeast Nucleoside diphosphokinase

(20 U/μl)50 μl

10xNDPK Buffer1 ml

活性定義

每單位指37度條件下，在ATP存在條件下每分鐘轉(zhuǎn)化1.0 μmol TDP到TTP所需酶量,。該酶比活為1X10e5 U/mg,，制品濃度約200 ng/μl。

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年,。

10xNDPK Buffer

200mM HEPES,pH7.5

1M Potassium glutamate

100 mM Magnesium acetate

50mM DTT

Yeast Nucleoside diphosphokinase試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果,，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試,。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管,，溶解管蓋上染料后,，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果,。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1、10 ,、100,、1000、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后,。

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