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T4 GP61 Primase試劑T4 噬菌體復(fù)制分為依賴于起始子的起始復(fù)制和依賴于重組酶的復(fù)制,。由起始復(fù)制產(chǎn)生的3'-ssDNA作為重組復(fù)制的第一步鏈侵入

的組份,， 該3'-ssDNA被T4 gp32 蛋白所覆蓋，同時將T4 UvsY募集到此,；T4 UvsY作為T4 UvsX的loader將其運載至此，

于此同時gp32被置換下來,， UvsX和UvsY形成突觸結(jié)構(gòu)， 然后侵入同源的雙鏈形成D-Loop,， 一旦形成D-Loop，

UvsX即被置換下來,。D-loop被置換鏈作為滯后鏈合成的模板，很快被gp32結(jié)合,。隨后,， 解旋酶loader gp59與gp32覆蓋的

DNA復(fù)制叉結(jié)合,，將gp41/61運載至此， gp61蛋白合成寡核苷酸片段促進滯后鏈DNA的合成,，而gp41通過解旋模板而促進先

導(dǎo)鏈的DNA合成。最后,，聚合酶的滑板蛋白T4 gp45蛋白和其loder蛋白 gp44/62與先導(dǎo)鏈相結(jié)合,，促進聚合酶gp43的組裝,，

T4 gp45蛋白將gp43運載至復(fù)制叉處后啟動先導(dǎo)鏈和滯后鏈的合成，gp44/62隨后從復(fù)制叉處解離,。因此,，

gp59作為解旋酶gp41的loader在gp41引導(dǎo)的DNA先導(dǎo)鏈合成中起到重要作用,。

組分

組分名稱100 μg

T4 gp59 Loader Protein (1 μg/μl)100 μl

儲存

-20℃可保存3年。

T4 GP61 Primase試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期),。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后,，倒置反應(yīng)管,，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1,、10 、100,、1000,、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前,，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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