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核酸內(nèi)切酶V (Endonuclease V)試劑來源于E.coli,，通過基因工程重組表達(dá)獲得,。該酶為Mg2+依賴的3’-5’核糖核酸外切酶,其可消化

幾乎所有線性RNAs底物，但不能消化環(huán)狀RNA(circular RNA),、套索RNA(lariat RNA)、3’突出端<7nt的雙鏈RNA,。

Rnase R核酸外切酶可高效的去除不含二級(jí)結(jié)構(gòu)的線性RNA,，從而純化獲得環(huán)狀RNA分子，便于后續(xù)RNA-sequencing

等實(shí)驗(yàn)研究,。

單位定義

在20 mM Tris-HCl（pH7.5）,，100 mM KCl，0.5 mM Mg2+條件下, 37°C下水解1 μg的poly-r(A)產(chǎn)物所需酶量為1個(gè)活性

單位。

組分

名稱數(shù)量

Rnase R (20 U/μl)25 μl/250 μl

10×Rnase R Buffer1 ml

應(yīng)用

生物樣品中環(huán)狀RNA的富集

內(nèi)含子套索序列的分析和鑒定等

環(huán)狀RNA研究

可變剪接研究

儲(chǔ)存

置于-20°C可保存3年,，避免反復(fù)凍融,。

核酸內(nèi)切酶V (Endonuclease V)試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果,，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期),。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后,，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后,，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果,。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1,、10 ,、100、1000,、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后,。

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