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Extreme Thermostable Rnase HII試劑是一種來(lái)源于耐熱的菌株的內(nèi)源性 核酸內(nèi)切酶,，它識(shí)別RNA/DNA 雜交鏈并切割RNA鏈，其對(duì)單鏈RNA切割活性極低,，且對(duì)dsDNA,、ssDNA無(wú) 切割活性。該RNase HII 酶在DNA/RNA duplex的單核糖核苷酸殘基處從5’端進(jìn)行切割,，切割后 產(chǎn)生一個(gè)5′ 端磷酸基團(tuán)和一個(gè) 3′ 端羥基,。該RNase HII 酶在 70- 75°C 具有最佳活性，在 50°C 到 75°C 間均具有活性,，但其在室溫下活性非常低,。該酶 極度耐熱，在95°C加熱30min后仍保留全部活性,，因此其與大多數(shù)的PCR緩沖體系兼容,，可用于 RNase H2依賴性PCR（rhPCR）等實(shí)驗(yàn)。與RNase HI 相比,，RNase HII可識(shí)別單個(gè)核糖核苷酸并進(jìn)行切 割,，而RNase HI識(shí)別四個(gè)連續(xù)核糖核苷酸的2'-OH；另外,，RNase HII可降解岡崎片段,，而Rnase HI沒(méi)有這個(gè)活性。

單位定義

一個(gè)單位是指在 60°C 下,，15分鐘切割 1nmol 含有單個(gè)RNA的嵌合DNA/RNA雜交雙鏈體底物所需的酶量,。

儲(chǔ)存

置于-20°C，可保存2年,。

Extreme Thermostable Rnase HII試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期),。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試,。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后,，倒置反應(yīng)管,，溶解管蓋上染料后,，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1,、10 、100,、1000,、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前,，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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