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Endonuclease IV 試劑又叫Nfo,，來源于E.coli,參與DNA損傷修復,。核酸內切酶IV可識別雙鏈DNA分子上的脫嘌呤/脫嘧啶（AP）位點，并切割 AP 位點 5′ 端的第一個磷酸二酯鍵,，產生 3′ 羥基和 5′ 脫氧核糖磷酸末端(deoxyribose phosphate, dRP),。另外該酶還具有3′二酯酶活性，能從 DNA 的 3′末端釋放磷酸甘油醛,、完整的脫氧核糖 5′-磷酸和磷酸,。該酶的最佳底物為AP雙鏈DNA，但對AP單鏈DNA也有一定活性,。

單位定義

一單位指在10µl反應體系中,，37°C反應15min，切割1 pmol 含一個AP位點的34mer寡核苷酸雙鏈,，所需要的酶量,。

酶儲存液

50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.

熱失活

85°C 20min。

儲存

置于-20°C可保存2年,，避免反復凍融,。

Endonuclease IV 試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應,。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期),。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后,，倒置反應管,，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色,，陰性表現出橙色,，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,，雜質耐受性很好,。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應20min后檢測結果,。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1,、10 ,、100、1000,、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前,，下圖為 65 度反應 30min 后,。

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