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Lambda核酸外切酶試劑作用于雙鏈DNA,，沿 5′→3′方向逐步切去5′單核苷酸,。最適底物是5′磷酸化的雙鏈 DNA，

也能緩慢降解單鏈DNA和非磷酸化底物,。該酶不能從DNA 的切刻或缺口處起始消化,。

組分

名稱數(shù)量

Lambda Exonuclease (5 U/μl)200 μl/1 ml

10×Lambda Exo Buffer1 ml/1 ml×5

單位定義

1單位指在50μl反應(yīng)體系中，37℃條件下,，30分鐘內(nèi)能從雙鏈DNA底物上催化產(chǎn)生10 nmol 酸溶性脫氧核糖核苷酸所需的酶量,。

儲存

置于-20°C，可保存3年,。

使用注意事項

1. 1×Lambda Exo Buffer：67 mM Glycine-KOH（pH 9.4 @ 25℃）,，2.5 mM MgCl2，50μg/ml BSA,，37℃溫育,。

2. 該酶的最佳反應(yīng)溫度為37°C，75°C 10min可失活,。

3. 5′-0H端的切割速度比5′-PO4端慢20倍,。單鏈DNA 比雙鏈DNA慢100倍。

50℃,，5min,。

Lambda核酸外切酶試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果,，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期),。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后,，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果,。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1、10 ,、100,、1000、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后,。

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