目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>常規(guī)試劑>>試劑>> C5014核酸外切酶I(E.coli)試劑
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1500U/15KU |
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貨號 | C5014 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
核酸外切酶I(E.coli)試劑具有從3’-5’方向降解單鏈 DNA 的外切酶活性,,能夠逐步釋放脫氧核糖核酸5'單磷酸,,
并留下完整的5'端二核苷酸。該酶來源于攜帶有E. coli exo I 基因的質(zhì)粒,,經(jīng)重組表達純化而得,。Exonuclease I多用于PCR
擴增后降解消化引物,該酶對于雙鏈DNA和磷?;蛞阴,;鶊F封閉的3’OH末端DNA鏈無活性。
單位定義
1 單位指在 37℃ 條件下,,30 分鐘內(nèi)催化釋放 10 nmol 的酸溶性核苷釋放所需要的酶量,。
組分
名稱數(shù)量
Exonuclease I(20 U/μl)75 μl
10×ExoI Buffer1 ml
應(yīng)用
從PCR混合物中去除引物
PCR產(chǎn)物測序之前用于在單管中使用大引物進行的PCR誘變反應(yīng)
從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA
檢測含有3'羥基末端的單鏈DNA的存在
儲存
置于-20°C,可保存3年,。
使用注意事項
(1)1×ExoI Buffer:67mM Glycine-KOH pH 9.5,,6.7mM MgCl2,10mM ,。該酶在常規(guī)PCR Buffer中也具有活性,。
(2)該酶的最佳反應(yīng)溫度為37°C,80°C 20min可失活,。
(3)該酶不能切割雙鏈DNA,,因此含有二級結(jié)構(gòu)的單鏈DNA需要變性后才能消化。
核酸外切酶I(E.coli)試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應(yīng)用實例1:在以A3824-03或 A3828-03,,用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,,1-6分別為1,、10、100,、1000,、10e4和10e6Copies,NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果,,可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期)。
應(yīng)用實例2: 用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。OG變色法為終點變色策略,,在反應(yīng)結(jié)束后,倒置反應(yīng)管,,溶解管蓋上染料后,,陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,陰性表現(xiàn)出橙色,區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制,,雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,,1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,,NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。
應(yīng)用實例3:A3825-01 紅黃變色反應(yīng)(肉眼觀察)
以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,,1-6分別為1,、10 、100,、1000,、104和106Copy,NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起
始前,,下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。
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