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熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶(HL dsDNase)試劑,，又名ezDNase或HL dsDNase)，為雙鏈特異性核酸酶,。

它可特異性地識別降解雙鏈DNA,，對單鏈DNA或RNA幾乎無活性，其降解dsDNA的能力比ssDNA高~5000倍,。此外,，

該雙鏈DNA特異性核酸酶降解雙鏈DNA的能力比bovine DNaseI高~30倍，從而特別適用于去除RNA樣品中的基因組DNA污染

,。該熱敏雙鏈DNA核酸酶可將DNA降解為2~8bp的產(chǎn)物,，且55℃ 5min可使該酶不可逆失活,，

同時又能保持RNA和ssDNA的穩(wěn)定性。另外,，該酶適合于對基因組樣品進行酶法片段化反應,。

單位定義

1單位指25°C條件下15min將10μg基因組DNA消化至80%的產(chǎn)物<500bp所需的酶量。

組分

名稱數(shù)量

HL dsDNase (2 U/μl)50 μl/500 μl

10×dsDNase Buffer1 ml /2 ml

儲存

置于-20°C,，可保存3年,。

使用注意事項

（1）1×dsDNase Buffer：20mM Tris-HCl pH8.0, 5mM MgCl2。該酶需要1~5mM MgCl2,。

（2）該酶對K+敏感,，反應體系中推薦K+濃度低于40 mM。

（3）通常在RT反應中的用量為0.1~0.5U/20 μl體系,。

（4）任何濃度的SDS,、鹽酸胍均抑制該酶活性。

（5）該酶的最佳反應溫度為25~37℃,，42℃ 30min后活性損失70%,。

熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶(HL dsDNase)試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結(jié)果,，可以看到檢測反應<20min(達平臺期),。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,，在反應結(jié)束后,，倒置反應管，溶解管蓋上染料后,，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結(jié)果,。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1、10 ,、100,、1000、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應起

始前,，下圖為 65 度反應 30min 后,。

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