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RnaseH試劑是一種核糖核酸內(nèi)切酶,，它能夠特異性地降解雜交到DNA鏈上的RNA磷酸二酯鍵,，故能降解RNA/DNA雜交鏈中的RNA鏈。該酶不能消化單鏈或雙鏈DNA,。該RNase H酶廣泛用于除去雜交到poly(dT)上的 mRNA poly(A)或除去cDNA第二鏈合成時mRNA,。

單位定義

1單位指50μl反應(yīng)體系中，37℃條件下,，20min內(nèi)從40pmol 長度為25bp的RNA-DNA雜交鏈中水解出1nmol核酸底物所需的酶量,。

儲存

置于-20°C，可保存3年,。

使用注意事項

（1）1×Rnase H Buffer：75mM KCl,，50mM Tris-HCl pH 8.3，5mM MgCl2,，10mM DTT,。

（2）該酶的最佳反應(yīng)溫度為37°C，65°C 20min使該酶失活,。

RnaseH試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期),。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后,，倒置反應(yīng)管,，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1,、10 、100,、1000,、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前,，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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