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SUMO 蛋白酶切對照融合蛋白試劑也稱為UIP蛋白酶，是一種具有較高活性的半胱氨蛋白酶,，來源于酵母編碼的MIP1基因,，其特異性識別UBL蛋白的三級結(jié)構(gòu)－SUMO（Small Ubiquitin-Like Modifier）。SUMO蛋白酶能夠識別完整的SUMO序列,，并依賴正確的蛋白質(zhì)構(gòu)象,，僅有完整的序列，沒有正確的結(jié)構(gòu),，SUMO酶是不能對目標蛋白進行切割的,。因此，該酶是目前切割特異性最的蛋白酶,，可在較廣泛的作用溫度和PH范圍（pH7-9）內(nèi)發(fā)揮作用,，切割的最佳溫度為30°C。SUMO蛋白酶的識別序列如下,，切割位點位于QIGG之后 SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG

本公司生產(chǎn)的SUMO蛋白酶含有雙His標簽,，酶切后，可通過Ni-NTA Resin親和純化,，很容易地將SUMO去除；雙His標簽保證了,，SUMO蛋白酶高親和力的結(jié)合Ni-NTA,，以最大限度的去除SUMO蛋白酶。該SUMO蛋白酶分子量約26kD,。

組分

組分名稱數(shù)量

SUMO 蛋白酶(10 U/μl)100 μl

10XSUMO Buffer1 ml

單位定義

在1XSUMO Protease Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% Igepal, 1 mM DTT)中,，30°C反應(yīng)1h，剪切>85％的100pmol底物,，所需要的酶量定義為一個活性單位,。

儲存

SUMO蛋白酶置于-20°C可保存2年。

SUMO 蛋白酶切對照融合蛋白試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果,，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期),。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后,，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后,，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果,。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1,、10 ,、100、1000,、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前,，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后,。

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