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常規(guī)試劑

試劑

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	1 kit
貨號	C1801H	應用領域	醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合

pCold-SUMO-10His原核蛋白表達試劑盒,，雅吉生物是一家生物企業(yè)主營ATCC細胞，細胞系,，原代細胞和培養(yǎng)試劑，重組蛋白，ELISA試劑盒、抗體,、熒光定量PCR檢測試劑盒

詳細介紹

pCold-SUMO-10His原核蛋白表達試劑盒pCold-SUMO-10His)是在pCold-SUMO載體基礎上改造而成,，該載體啟動子(CS Promoter)來源于南極嗜冷細菌,，

在低溫下(15度)才能啟動蛋白的表達。低溫下細菌生長緩慢,，使得蛋白合成速度減慢,，從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的

幾率，提高了蛋白可溶性表達,，增強了活性蛋白的表達比率,。該表達系統(tǒng)所包含的SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的

表達量，而且能進一步提高蛋白的可溶表達幾率,。另外,，TEE信號肽可增強冷啟動子調(diào)控下目的蛋白的高表達。

升級后的pCold-SUMO-10His載體,，其SUMO蛋白標簽含有10個組氨標簽（10His tag）,，使其結(jié)合Ni-NTA的能力更強。

與較早版本的pCold-SUMO表達系統(tǒng)相比,，pCold-SUMO-10His表達系統(tǒng)在保留了原有系統(tǒng)的蛋白可溶性生產(chǎn)能力,、

高特異性剪切能力的情況下，顯著提高了與Ni-NTA的結(jié)合能力,。通過與Ni-NTA結(jié)合能力的提高,，在以下三個方面改善了

生產(chǎn)重組蛋白的性能：

（1）提高了粗蛋白樣品中目標蛋白的捕獲能力，從而提高純化產(chǎn)量,；

（2）在蛋白純化過程中可以使用更高濃度的咪唑進行漂洗,，去雜蛋白的能力明顯提升，從而獲得更高純度的重組蛋白,；

（3）在重組蛋白酶切去除SUMO標簽后,，利用Ni-NTA去除SUMO標簽更為，獲得純度更高的無標簽目標蛋白,。組分

組分名稱數(shù)量保存

pCold-SUMO-10His Vector (200 ng/μl)50 μl-20℃

pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid (20 ng/μl)20 μl

SUMO Protease (10 U/μl)100 μl

10×SUMO Buffer1 ml

rTEV Protease (10 U/μl)100 μl

20×rTEV Buffer1ml

1700X氯霉34mg/ml）1 ml

200X L-阿拉伯糖（100mg/ml）1 ml

1000X四環(huán)素（2mg/ml）1 ml

E.coli Transfer Reagent1.2 ml

Lyophilized Arctic (DE3) competent cells（10T)1瓶

Lyophilized BL21(DE3)Chaprone competent cells (10T)1瓶

主要特征

冷啟動子,，低溫誘導表達，最大限度地提高蛋白地可溶性

分子伴侶可協(xié)助蛋白的正確折疊

可大大的提高蛋白表達量

兩種宿主菌和兩種蛋白酶可選,，使實驗方案更加靈活

應用

包涵體蛋白的最佳解決方法,，提高蛋白的可溶性優(yōu)化表達,。

pCold-SUMO-10His原核蛋白表達試劑盒恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結(jié)果,，可以看到檢測反應<20min(達平臺期),。

應用實例2：用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略,，在反應結(jié)束后,，倒置反應管，溶解管蓋上染料后,，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應20min后檢測結(jié)果,。