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ssDNA/RNA環(huán)化連接酶試劑為熱穩(wěn)定的DNA/RNA連接酶，不依賴(lài)于A(yíng)TP,，可催化單鏈DNA或單鏈

RNA的分子內(nèi)環(huán)化,。環(huán)化反應(yīng)中，要求催化底物單鏈DNA/RNA具有5’-磷酸基團(tuán)和3’-OH基團(tuán),。對(duì)于大于15nt的單鏈底物,，

該酶均能高效的連接。

組分

組分名稱(chēng)數(shù)量

ssDNA/RNA CircLigase (100 U/μl)20 μl/200 μl

10×CircLigase Buffer500 μl

50 mM MnCl2250 μl

活性定義

65°C 1h條件下,，催化1pmol 5’-磷酸化的ssDNA底物環(huán)化,，所需的酶量定義為1U。

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年,。

ssDNA/RNA環(huán)化連接酶試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果,，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期),。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后,，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后,，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類(lèi)型限制,，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果,。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀(guān)察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1、10 ,、100,、1000、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后,。

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