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血清血漿TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用加A法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，加A法的反轉(zhuǎn)錄效率遠(yuǎn)高于莖環(huán)法,，因此,，采用該方法可極大

的提高檢測靈敏度（原理見圖1）。該試劑盒操作簡單,，僅需要兩步即可輕松完成miRNA的cDNA合成,，合成的cDNA可用于

所有miRNA的后續(xù)定量檢測。miRNA反轉(zhuǎn)錄完畢后采用特異性的上游引物和接頭引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,，F(xiàn)AM標(biāo)記TaqMan探針

作為熒光報(bào)告基團(tuán)進(jìn)行定量檢測（原理見圖1）,。

專用于血清血漿miRNAs分子的反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)（不可用于組織和細(xì)胞），

轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA產(chǎn)物用于TaqMan定量PCR方法檢測miRNAs分子

組分

組分名稱數(shù)量(25T/100T）

5×TaqMan miRNA RT Solution A65μl/250μl

10×TaqMan miRNA RT Solution B65μl/250μl

10×PS TaqMan miRNA RT Primer65μl/250μl

RNase Free H2O1ml/1mlx2

儲(chǔ)存

請置于-20°C,，可保存2年,；避免反復(fù)凍融。

血清血漿TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果,，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試,。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管,，溶解管蓋上染料后,，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果,。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1,、10 ,、100、1000,、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前,，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后,。

雅吉生物是一家生物企業(yè)主營ATCC細(xì)胞，細(xì)胞系,，原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑,，重組蛋白，ELISA試劑盒,、抗體,、熒光定量PCR檢測試劑盒更多產(chǎn)品歡迎咨詢。