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TdT末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase)試劑是一種不依賴于模板的DNA聚合酶,，催化脫氧核苷酸結合到DNA分子的3’羥基端,。帶有突出、

凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子 均可作為TdT的底物,，加尾長度可達5~300nt,。本酶經(jīng)電子重構架技術篩選，

使其可以在45°C高溫下反應,，從而避免因DNA二級結構造成的加尾效 率下降,。優(yōu)化的活性中心結構，使其對模板底物結合能力

更強，底物加尾比例更高,。該末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）廣泛用于DNA的3’末端添加同聚物,、利用修飾堿基（如 ddNTP，DIGdUTP）

標記DNA 3’末端,、TdT介導的dUTP 缺口末端標記技術（細胞凋亡的原位檢測）等試驗,。

組分

組分名稱數(shù)量

Terminal Transferase (20 U/μl)50 μl

10×TdT Buffer1 ml

應用

寡核苷酸或DNA?3’羥基末端標記

DNA末端加尾(DNA?tailing)

5’-RACE

合成同一種脫氧核苷酸的寡聚鏈

活性定義

37℃  60分鐘內(nèi)，催化1nmol?dNTP加入到多聚核苷酸3’羥基末端中所需的酶量定義為1個活性單位

儲存

-20℃可保存3年,。

熱失活

75°C 20min,。

注意事項

1,、適量EDTA可使Terminal Transferase的活性喪失,。

2、金屬離子螯合劑,，較高濃度的銨根離子,、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對Terminal Transferase活性具有抑制作用,。

TdT末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase)試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應25min的檢測結果,，可以看到檢測反應<20min(達平臺期),。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管,，溶解管蓋上染料后,，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10,、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應20min后檢測結果,。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1、10 ,、100、1000,、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結束反應起

始前,，下圖為 65 度反應 30min 后,。

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