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T4 DNA Polymerase (exo-)試劑是來(lái)源于T4噬菌體的DNA聚合酶，又名T4 gp43,，在T4噬菌體DNA復(fù)制過(guò)程中引導(dǎo)先導(dǎo)鏈和滯后鏈沿5'-3'

方向延伸,。通過(guò)對(duì)第219個(gè)氨基酸進(jìn)行點(diǎn)突變修飾D219A，使得該酶失去 3'-5' 外切核酸酶的活性,，但保留了聚合酶活性,，

且該酶的聚合酶活性強(qiáng)于DNA 聚合酶 I。 與 DNA 聚合酶 I 不同,，T4 DNA 聚合酶不具有 5'-3' 核酸外切酶活性,。

組分

組分名稱250U

T4 DNA Polymerase exo- (5 U/μl)50 μl

10xT4 DNA Pol Buffer1 ml

活性定義

一個(gè)活力單位即在37°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量,。

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年,。

10X T4 DNA Pol Buffer

200 mM Tris-HCl，pH7.9

500 mM NaCl

100 mM MgCl2

5 mM DTT

1 mg/ml BSA

熱失活

75°C,， 20 min

T4 DNA Polymerase (exo-)試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果,，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試,。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管,，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果,。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1、10 ,、100,、1000、104和106Copy,，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后,。

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