目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>常規(guī)試劑>>試劑>> D0302ThermoStable V Reverse transcriptase試劑
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20KU |
|---|---|---|---|
| 貨號 | D0302 | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
ThermoStable V Reverse transcriptase試劑是在鼠源病毒反轉(zhuǎn)錄酶基礎(chǔ)上進行定點突變改良而得。
該酶去除了RNase H活性中,，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA,。同時經(jīng)過突變文庫篩選,，使得其熱穩(wěn)定性更強，
可耐受65℃高溫反應,。相比于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應,，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開RNA二級結(jié)構(gòu)，
從而提高復雜RNA模板的擴增性能,、提高反轉(zhuǎn)錄cDNA的長度和產(chǎn)量,，從而提高后續(xù)檢測的靈敏度。
組分
組分名稱數(shù)量
ThermoStable V RTase (200 U/μl)100 μl
10×RT Buffer1 ml
單位定義
以poly(rA)為模板,、oligo(dT)為引物,，在37°C條件下，10分鐘內(nèi)催化1 nmol的dTTP摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,，
定義為一個活性單位,。
儲存
-20°C可保存2年。
ThermoStable V Reverse transcriptase試劑恒溫擴增使用策略及實例展示
應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期),。
應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試,。OG變色法為終點變色策略，在反應結(jié)束后,，倒置反應管,，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應20min后檢測結(jié)果。
應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）
以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1,、10 、100,、1000,、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應起
始前,，下圖為 65 度反應 30min 后。
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