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Golden MLV Reverse Transcriptase試劑在鼠源病毒反轉(zhuǎn)錄酶基礎(chǔ)上進(jìn)行改良而得的第四代反轉(zhuǎn)錄酶，通過定點(diǎn)突變?nèi)コ薘Nase H活性

,，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA,。同時(shí)經(jīng)過突變文庫(kù)篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng),，可耐受55℃高溫反應(yīng),。

相比于傳統(tǒng)42℃條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用55℃反轉(zhuǎn)錄可更好地打開RNA二級(jí)結(jié)構(gòu),，從而提高復(fù)雜RNA模板的擴(kuò)增性能,、

提高反轉(zhuǎn)錄cDNA的長(zhǎng)度和產(chǎn)量，因此能更好地提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度,。MLV反轉(zhuǎn)錄酶

組分

組分名稱數(shù)量

Golden MLV Reverse Transcriptase (200 U/μl)100 μl

10×RT Buffer0.4 ml

單位定義

以poly(rA)為模板,、oligo(dT)為引物，在37°C條件下,，10分鐘內(nèi)催化1 nmol的dTTP摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,，

定義為一個(gè)活性單位。

儲(chǔ)存

-20°C可保存2年,。

Golden MLV Reverse Transcriptase試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03,，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試,。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管,，溶解管蓋上染料后,，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色,，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好,。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1、10,、100,、1000、10e4和10e6Copies,，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板,，1-6分別為1,、10 、100,、1000,、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板,。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前,，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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