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2XRAPA HiFi PCR Mix試劑

特征
超保真擴(kuò)增：~280倍Taq的保真性能,，是載體構(gòu)建,、點(diǎn)突變,、NGS模板擴(kuò)增、基因合成的最佳用酶,。 快速擴(kuò)增：具有6kb/min的擴(kuò)增能力,。 長片段擴(kuò)增：質(zhì)粒、λ DNA 等簡單模板可以有效擴(kuò)增>20 kb,，基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb,，cDNA可以有效擴(kuò)增>8kb。
儲存
長期儲存置于-20°C以下,，可保存2年,，避免反復(fù)凍融；短期使用置于4°C（3個月）保存,，一經(jīng)融化后請放置于4°C,，勿再凍存。
反應(yīng)實(shí)例
1. 長片段擴(kuò)增能力
分別以λDNA,、human gDNA,、human cDNA為模板，使用RAPA HIFI PCR Mix進(jìn)行擴(kuò)增,，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles,，結(jié)果如上圖所示，對于不同種類DNA模板的長片段靶基因,，RAPA HIFI PCR Mix均有良好的擴(kuò)增性能,。
常見問題及解決方案：
無擴(kuò)增或產(chǎn)量低 循環(huán)數(shù) 退火溫度 模板DNA純度和用量 延伸時間 引物用量 引物設(shè)計(jì) 增加循環(huán)數(shù)至35~40cycles 以2℃為單位降低退火溫度 使用高純度的模板DNA，使用合適的模板量,。 適當(dāng)增加延伸時間 在0.1μM~0.5μM之間選取合適的引物量 重新設(shè)計(jì)優(yōu)化引物 出現(xiàn)雜帶或Smear 退火溫度 引物濃度 循環(huán)數(shù) 模板DNA使用量 引物 以2℃為單位提高退火溫度 降低引物濃度至0.2μM 降低循環(huán)數(shù)至25~28cycles 使用合適的模板量,，不要過多使用 重新設(shè)計(jì)優(yōu)化引物

恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試,。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng),。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1,、10,、100、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果,，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試,。OG變色法為終點(diǎn)變色策略,，在反應(yīng)結(jié)束后,，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后,，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色,，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯,。且該方法不受樣本類型限制,，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板,，1-6分別為1,、10、100,、1000,、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板,。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果,。

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RAPA HiFi DNA Polymerase(5U/ul)

HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,無甘油)

SD DNA Polymerase (10U/ul)

Tli (exo-) DNA Polymerase(5U/ul)

Therminator DNA Polymerase (2 U/μl)

Taq FS DNA Polymerase(5U/ul)

3173 DNA Polymerase(5U/ul))

Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）

ThermoStable V Reverse transcriptase（200U/ul）(無甘油)

TGIRT-III Reverse transcriptase (10pmol/ul) 50ul

RNaseOUT-RNase Inhibitor (40 U/μl)

RnaseOUT-RNase Inhibitor(80U/ul), 無甘油

Murine Rnase inhibitor(40U/ul)

Murine Rnase inhibitor(80U/ul), 無甘油

Equi-phi29 DNA Polymerase

Klenow Fragment(exo-)

Bsu DNA聚合酶 大片段

Sau DNA Polymerase

T4 DNA Polymerase (exo-)

Hi T7 RNA Polymerase

TdT末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase)

加A聚合酶（E.coli）

Super Taq DNA Polymerase

dNTP Mixture (10 mM each)

rNTP Mixture(25 mM each)

6XSafe Dye Loading Buffer