目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>常規(guī)試劑>>試劑>> A3828-02Bst 4.0 Basic Bead試劑
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更新時(shí)間:2024-10-31 18:17:00瀏覽次數(shù):400評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100Tx25μl |
---|---|---|---|
貨號(hào) | A3828-02 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
Bst 4.0 Basic Bead試劑為全體系凍干微球制品,,內(nèi)含恒溫?cái)U(kuò)增所用
的反應(yīng)緩沖液,、Mg2+、dNTP,、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶
等,,其不包含任何染料,使用時(shí)只需要加入引物,、模板即
可進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增,。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依
賴于 RNA 模板的聚合酶活性(逆轉(zhuǎn)錄),還具有依賴于
DNA 的聚合酶活性,,因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使
用該制品進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增,。該制品是進(jìn)行 LAMP 及
RT-LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)的試劑,。
本制品不包含任何顯色染料,可自行搭配相關(guān)染料
或檢測手段進(jìn)行 LAMP 反應(yīng),,包括搭配 OG 染料管進(jìn)行
橙綠變色,、搭配標(biāo)記 Oligo 進(jìn)行試紙條檢測、搭配熒光染
料進(jìn)行熒光檢測,、搭配 Molecular Beacon 探針進(jìn)行熒光
檢測等方法,。
貨 號(hào) 名 稱 規(guī)格
A3828-02 Bst4.0 Basic Bead 100 個(gè)
儲(chǔ)存:-20℃保存 2 年;室溫(25℃)保存>6 個(gè)月,。
使用方法:(進(jìn)行 LAMP 橙綠變色擴(kuò)增):
1. 關(guān)于 OG 橙綠變色管(貨號(hào):A3828-21)說明:橙綠變
色染料(OG Dye)以烘干的形式預(yù)加在8聯(lián)管蓋上,。LAMP
反應(yīng)完畢后,將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后,。LAMP
的反應(yīng)產(chǎn)物將與 OG 染料形成綠色肉眼可見變色反應(yīng)(陽
性),,而未擴(kuò)增的 EP 管為深橙色(陰性)。本試劑管常溫
長期保存,。
2. 配制變色 LAMP 反應(yīng)體系
在 OG 染料管(0.2ml EP)反應(yīng)管中加入下述試劑
Bst4.0 Basic Bead 1 粒
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM,、
LoopF/B 分別為 4~8 μM、F3/B3 分別為 2 μM,。
注意:全部試劑加入完畢后,,輕彈 EP 管底部后,再蓋上 OG 橙
綠變色管(蓋上管蓋后務(wù)必不能再劇烈混合與倒置,,以防止將管蓋
上的 OG 染料溶解,,OG 染料一旦混入反應(yīng)液中將會(huì)終止 LAMP
反應(yīng))。
3. 反應(yīng)體系配好后,,置于 65°C 進(jìn)行反應(yīng) 15~30min,。(擴(kuò)
增良好的引物組合,通常 20min 即可變色,,一般不超過
30min),。
4. 觀察結(jié)果:反應(yīng)結(jié)束后,從加熱裝置中將反應(yīng)管取出,,
室溫 2min,,使整個(gè)反應(yīng)管冷卻下來。再次用力將反應(yīng)管
蓋壓緊,,以防止液體泄露,。將反應(yīng) EP 管倒置,并手腕輕
甩,,反應(yīng)液浸泡 EP 管蓋上的 OG 染料,,靜置 1min(中
間可輕彈 1-2 次,以加速溶解 OG 染料),。再將 EP 反應(yīng)
管正置,,并輕甩反應(yīng)液到 EP 管底部,,此時(shí)擴(kuò)增樣品將變
為鮮艷肉眼可見綠色,而陰性未發(fā)生擴(kuò)增的管將為深橙
色,。
注意:(1)觀察結(jié)果時(shí),,盡可能不要與配制反應(yīng)空間共用,
以防止污染操作臺(tái),。(2)盡管 HaiGene 選取的為高密封
性的 EP 管,,但也時(shí)有 EP 管發(fā)生液體泄露。在反應(yīng)管倒
置時(shí),,可用紙巾包裹 EP 管,,一旦發(fā)生泄露,丟棄紙巾,,
防止臺(tái)面污染,。(3)整個(gè)操作過程,佩戴手套,、口罩等個(gè)
人防護(hù)用品,。
注意事項(xiàng):
(1)關(guān)于礦物油的使用,在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后,,
可加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部,,以減少氣溶膠的污
染。礦物油并不影響 OG 染料的溶解,。
(2)在使用其它熒光染料時(shí),,使用濃度可自行優(yōu)化,通
常來講,,參考供應(yīng)商提供濃度的 0.25~0.8x,過高濃度的
染料可能導(dǎo)致擴(kuò)增失敗,。
(3)本試劑不支持,,濁度、pH 變色,、HNB 變色反應(yīng),,
請勿嘗試。
(4)關(guān)于 LAMP 成品試劑的建議,, Bst 4.0 Basic Bead
凍干球和 OG 橙綠變色管均為室溫穩(wěn)定狀態(tài),,可長期保
存。將擴(kuò)增引物加入到 OG 橙綠變色管底部,,于 70°C 烘
干,,再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測試劑。
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