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Bst 3.0 DNA/RNA聚合酶(32U/ul)試劑與Bst 2.0 DNA 聚合酶和Bst DNA 聚合酶大片段相

比,，Bst 3.0 DNA聚合酶具有更佳的等溫?cái)U(kuò)增活性和更強(qiáng)的

逆轉(zhuǎn)錄活性,。無論以DNA還是RNA為模板，該酶都具有5’-3’

的DNA聚合酶活性和強(qiáng)烈的鏈置換活性,，但該酶5’-3’和3’-5’

的外切酶活性缺失,。

在以RNA為模板的LAMP實(shí)驗(yàn)中，可實(shí)現(xiàn)單酶系統(tǒng)反應(yīng),。

該酶在60-65°C之間具有很好的反轉(zhuǎn)錄活性,，可有效解決具

有二級(jí)復(fù)雜結(jié)構(gòu)的RNA模板的反轉(zhuǎn)錄，而Bst 2.0 DNA 聚合

酶和Bst DNA 聚合酶大片段無此活性,。

組分

名稱 16KU

Bst 3.0 DNA/RNA

Polymerase(glycerol free) (32 U/μl)

500 μl

10×Isothermo Buffer(Mg2+ free) 20 ml

100 mM Mg2+ 20 ml

Bst 3.0 DNA/RNA聚合酶(32U/ul)試劑注意：該酶制品中不含有甘油,，可用于建立凍干體系。

單位定義：

一個(gè)活力單位即在 65°C 條件下，30 分鐘內(nèi)催化 10 nmol

dNTP 的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量,。

儲(chǔ)存：-20℃ 可保存 3 年,。

典型的 LAMP 反應(yīng)

1. 按以下組分配制 LAMP 反應(yīng)液

Bst 3.0 DNA/RNA Polymerase (32 U/μl) 0.05~0.25 μl

10×Isothermo Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl

100 mM Mg2+

 X μl

dNTP Mixture (10 mM each) 3.5 μl

模板 DNA/RNA 10ng~1 μg

*10X Primers 2.5μl

ddH2O Up to 25 μl

*10X Primers：16 µM FIP/BIP, 2 µM F3/B3, 4 µM LoopF/B each。

2. 65°C 30~60min; 85°C 5min 失活,。

使用注意事項(xiàng)：

(1) Mg2+的使用濃度為 4~10 mM 濃度,，Isothermo Buffer

中沒有 Mg2+，通常情況下,，在 6-8 mM Mg2+條件下可獲得

較好的 LAMP 結(jié)果,。

(2) 有文獻(xiàn)報(bào)道加入 Tte Uvrd 解旋酶可改善 LAMP 的效果。

(3) 使用無模板 DNA 作為對(duì)照檢測(cè)擴(kuò)增的特異性,。