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細(xì)胞名稱：HCT116 L人細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃,、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細(xì)

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

2,、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中,。

b,、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2,、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3,、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4,、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中,。C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1,、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2,、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng),。

C,、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2,、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3,、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

售后服務(wù)告知書

1）細(xì)胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題,，細(xì)胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問題,，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,，（需提供真實清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片）,，重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,，出現(xiàn)污染,，重發(fā),；

5. 細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,，核實后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,，3天未告知的,，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,，并跟技術(shù)人員溝通的,，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā),。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費(fèi)重發(fā),。

二）細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些,？

1. 客戶造成細(xì)胞污染,，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),；

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā),；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,，不重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),，未告知,，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定,。

YS3040CINS-1大鼠胰島瘤細(xì)胞

YS3041C人膀胱癌細(xì)胞

YS3042CPC-12(高分化)大鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞

YS3043CPK15豬腎細(xì)胞

YS3044CPK13豬腎細(xì)胞

YS3045CNH-6人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞

YS3046CH4-II-E-C3大鼠肝癌細(xì)胞

YS3047CL6大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞

YS3048CMC3T3-L1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

YS3049CSW1783人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞

YS3050CBecker人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞

YS3051CMPC-11小鼠漿細(xì)胞

YS3052CCCF-STTG1人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞

YS3053CSTO小鼠胚胎纖維細(xì)胞

YS3054CCOS-1SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞

YS3055CMarc145猴腎細(xì)胞

YS3056CHs821.T巨細(xì)胞

YS3057CKURAMOCHI人卵巢癌細(xì)胞

YS3058CHs819.T人軟骨肉瘤

YS3059CSW1353人骨肉瘤細(xì)胞

YS3060CHs822.T尤因氏肉瘤

YS3061CHs863.T尤因氏肉瘤

YS3062CRD-ES尤因氏肉瘤

YS3063CSK-ES-1肉瘤（未分化骨肉瘤,、尤文氏肉瘤）

YS3064CSW1088人腦星形膠質(zhì)細(xì)胞

YS3065CHs737.T巨細(xì)胞

YS3066Cmousepodocyte腎小球足細(xì)胞

YS3067CHs870.T人骨肉瘤細(xì)胞

YS3068CHs888.T人骨肉瘤細(xì)胞

YS3069CT1-73人骨肉瘤細(xì)胞

YS3070CHs706.T巨細(xì)胞

YS3071CDaudi人Burkkit淋巴瘤細(xì)胞

YS3072CMT-4人急性淋巴母白血病細(xì)胞細(xì)胞

YS3074CMOLT-4人急性淋巴母細(xì)胞

YS3075CT2人淋巴母細(xì)胞

YS3076CSH-SY5Y人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

YS3077CCA46人burkitt淋巴瘤細(xì)胞

YS3078CIMR-32人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

YS3079CH9人T淋巴瘤細(xì)胞

YS3081CRAJI人Burkitt’s淋巴瘤細(xì)胞

YS3082CrNSCs-12神經(jīng)干細(xì)胞

YS3083CJ82人膀胱移行細(xì)胞

YS3084CSW780人膀胱移行細(xì)胞

YS3085CUM-UC-3人膀胱移行細(xì)胞

YS3086CT24人膀胱移行癌細(xì)胞

YS3087CmMMSC-11骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

YS3088CHBVSMC人腦微血管平滑肌細(xì)胞

YS3089CBALL-1人B淋巴細(xì)胞

YS3090CmNSCs-11神經(jīng)干細(xì)胞

YS3091CHO-8910PM人卵巢癌細(xì)胞

YS3092CSK-N-BE(2)SK-N-BE(2)人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

YS3093CSK-N-SHSK-N-SH人神經(jīng)母瘤細(xì)胞

YS3094CT98G人多形性惡性膠質(zhì)瘤T98G[T98-G]

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