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細胞名稱：BEL7405人肝癌細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法,。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴(yán)格無菌操作，將細胞瓶放入37℃,、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理,。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張）,，前三天照片是重要售后依據(jù),，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好,。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)步驟

細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃,、5%CO₂孵箱培養(yǎng),；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養(yǎng),，傳代具體步驟如下細胞傳代：

A1,、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

A2,、懸浮細胞凍存：

1,、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min,；

2,、棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001）,，混勻后加入凍存管中,。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）

3,、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可,；如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小時以上,。

B1,、對于貼壁細胞，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，使之脫落后吸出,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基重懸,。

4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入到37℃,、5%CO₂的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2,、貼壁細胞凍存：

1,、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次,；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心 5min；

3,、 棄上清,，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中,。

細胞復(fù)蘇：

1,、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2,、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；

3、棄上清,，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4,、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

注意事項：有些細胞比較特殊,，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落,，這是正常現(xiàn)象,。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)）,，沉淀加入消化液1-2ml,，輕輕吹打，重懸,，消化1-2分鐘后,，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,，棄上清,，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25）,，補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

售后服務(wù)告知書

1）細胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些,？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,，細胞丟失,、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,，重發(fā),；

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),，給我們提出真實的實驗結(jié)果,，核實后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后,，絕大多數(shù)細胞未存活,，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā),；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,，出現(xiàn)污染，重發(fā),；

5. 細胞活性問題,，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,，核實后予重發(fā),；

6. 細胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照，3天未告知的,，視為產(chǎn)品合格,。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的,，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā),。

二）細胞出現(xiàn)問題,，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染,，不重發(fā),；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好,，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,，不重發(fā),；

6. 細胞收到2天內(nèi)，未告知,，不重發(fā),；

7. 視具體情況而定。

YS329CIM-9人外周血B淋巴細胞

YS330C瘤J774A.1小鼠腹水單核細胞

YS331CLP-1人多發(fā)性骨髓瘤細胞

YS332CMAVER-1人淋巴瘤細胞

YS333CMIAPaCa-2人胰腺癌腫瘤細胞

YS334CNCI-H226人肺鱗癌細胞

YS335CSCC4人口腔鱗癌細胞

YS336CSCC9人舌鱗癌細胞

YS337CSKO-007人骨髓瘤細胞

YS338CTM4正常小鼠睪丸細胞

YS339CTWO3人鼻咽癌細胞

YS340CWRL-68人正常肝細胞

YS341CHL1小鼠心肌細胞

YS342CDAMI保白血病細胞人巨核細胞

YS343C乳腺癌MDA-MB-157

YS344CMDBK(NBL-1)牛腎細胞

YS345CQSG-7701人肝細胞

YS346CRF/6A猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細胞

YS347CT-47D人乳腺管癌細胞

YS348CBNLCL.2小鼠胚胎肝細胞

YS349CF81貓腎細胞

YS350C瘤H4人神經(jīng)膠質(zhì)細胞

YS351CH9人T淋巴細胞

YS352CHEH人胚心肌細胞

YS353CHS578T人乳腺癌細胞

YS354CHs-746T人胃癌細胞

YS355C癌J82人膀胱移行細胞

YS356CJM白血病細胞人T淋巴細胞

YS357CKG-1人髓性紅白血病細胞

YS358CMT-4白血病細胞人T細胞

YS359CPLC/PRF/5人肝癌亞歷山大細胞

YS360CSF126人腦瘤細胞

YS361CMIN6小鼠胰島素瘤細胞

YS362CHBMEC人腦微血管內(nèi)皮細胞

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