日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

細胞名稱：L1210小鼠白血病細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法,。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃,、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理,。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張）,，前三天照片是重要售后依據(jù),，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松,，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)步驟

細胞傳代：如果未超過80%匯合度時,，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃,、5%CO₂孵箱培養(yǎng),；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養(yǎng),，傳代具體步驟如下細胞傳代：

A1,、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

A2、懸浮細胞凍存：

1,、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min；

2,、棄上清,，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中,。（如：凍一支,，加入 1ml 無血清凍存液即可）

3、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可,；如后期要將細胞轉入液氮罐中,，需在-80℃冰箱存

放 24 小時以上。

B1,、對于貼壁細胞,，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，使之脫落后吸出,，然后將懸液轉移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基重懸,。

4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入到37℃,、5%CO₂的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2,、貼壁細胞凍存：

1,、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次,；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心 5min；

3,、 棄上清,，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中,。

細胞復蘇：

1,、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍,， 直至凍存管中無結晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2,、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,，1000rpm離心5min；

3,、棄上清,，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶,，放于37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4、第二天,，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落,，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,，1000rpm離心5min,，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml,，輕輕吹打,，重懸，消化1-2分鐘后,，加5ml培養(yǎng)基終止反應,。再離心，棄上清,，加1-2ml培養(yǎng)基重懸,。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

YS170CL1210小鼠白血病細胞

YS171CL929小鼠成纖維細胞

YS172C肺腺癌LA795瘤

YS173C瘤LAN-5神經(jīng)母細胞

YS174CLewis小鼠肺癌細胞

YS175CLLC小鼠肺癌細胞

YS176C小鼠骨肉瘤LM-8

YS177C前列腺癌LNCaP

YS178CLNCaPcloneFGC人前列腺癌細胞

YS179CLOVO人結腸癌細胞

YS180CLs-174-T人結腸癌細胞

YS181C肺癌LTEP-P（圓形）小細胞

YS182CM1小鼠白血病細胞

YS183CM14人黑色素瘤細胞

YS184C瘤M17神經(jīng)母細胞

YS185CMA104非洲綠猴胚胎腎上皮細胞

YS186CMA-891小鼠乳腺癌高轉移細胞

YS187CMCF-7人乳腺癌細胞

YS188CGL261小鼠膠質(zhì)細胞

YS189CMDA-MB-231人乳腺癌細胞

YS190CMDA-MB-435人乳腺癌高轉移細胞

YS191CMDA-MB-435S人乳腺導管癌細胞

YS192CMDA-MB-453人乳腺癌細胞

YS193CMDA-MB-468人乳腺癌細胞

YS194CMDCK狗腎細胞

YS195CMFC小鼠胃癌細胞

YS196CMG-63人成骨肉瘤細胞

YS197C胃腺癌MGC-803

YS198CMGC-823人低分化前胃癌細胞

YS200CMKN-28人胃癌高轉移細胞

YS201CMKN45人胃癌細胞

YS202C長臂猿淋巴瘤MLA-144

YS203CMOLT-4白血病細胞人急性淋巴母細胞

YS204C癌MPC-83胰腺腺泡細胞

YS205CMRC-5人胚肺成纖維細胞

更多細胞歡迎咨詢我們：L1210小鼠白血病細胞ATCC