目錄:上海雅吉生物科技有限公司>>ATCC細胞>>ATCC原裝細胞系>> YS030CAM人腺樣囊性癌細胞(高轉(zhuǎn)移)ATCC
供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | T25瓶/2冷凍管 |
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貨號 | YS030C | 主要用途 | 科研實驗 |
細胞名稱:AM人腺樣囊性癌細胞(高轉(zhuǎn)移)ATCC
細胞代次:P4
細胞規(guī)格:T25瓶(包郵)/2冷凍管(需加干冰運輸費)
細胞凍存:無血清凍存液
細胞傳代:第一次建議1:2
細胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,,消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作,,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理,。顯微鏡觀察細胞生長情況,,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存(最好40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售后依據(jù),,不提供照片默認收到狀態(tài)良好,。(注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,,以便進行對比培養(yǎng))
培養(yǎng)步驟
細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,,留5ml培養(yǎng)基,,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng),;如果細胞密度超80%,,即可進行傳代培養(yǎng),,傳代具體步驟如下細胞傳代:
A1、對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
A2,、懸浮細胞凍存:
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,,將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm
離心5min,;
2、棄上清,,沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液(C7001),,混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,,加入 1ml 無血清凍存液即可)
3,、將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,,需在-80℃冰箱存
放 24 小時以上,。
B1、對于貼壁細胞,,傳代可參考如下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細胞,,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。
4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),,補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,,最后放入到37℃、5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
B2,、貼壁細胞凍存:
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,,用PBS清洗細胞一次;
2,、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,,再輕輕吹打細胞使之脫落,,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min,;
3,、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),,混勻后加入凍存管中,。
細胞復蘇:
1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),,快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,;
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,,1000rpm離心5min,;
3、棄上清,,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
4,、第二天,換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項:有些細胞比較特殊,,如貼壁不牢,,在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落,這是正?,F(xiàn)象,。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm離心5min,,收集上清作過渡培養(yǎng)(后期對比培養(yǎng)),,沉淀加入消化液1-2ml,輕輕吹打,,重懸,,消化1-2分鐘后,加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng),。再離心,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基重懸,。然后按1:2比例進行分瓶傳代(兩個T25),,補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
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