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細胞名稱：A375人惡性黑色素瘤細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作,，將細胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理,。顯微鏡觀察細胞生長情況,，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù),，不提供照片默認收到狀態(tài)良好,。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,，以便進行對比培養(yǎng)）

培養(yǎng)步驟

細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,，留5ml培養(yǎng)基,，放入37℃、5%CO₂孵箱培養(yǎng),；如果細胞密度超80%,，即可進行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下細胞傳代：

A1,、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

A2,、懸浮細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min,；

2、棄上清,，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001）,，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支,，加入 1ml 無血清凍存液即可）

3,、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中,，需在-80℃冰箱存

放 24 小時以上,。

B1、對于貼壁細胞,，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞,，使之脫落后吸出，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基重懸,。

4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶）,，補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶,，最后放入到37℃、5%CO₂的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

B2,、貼壁細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次；

2,、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心 5min,；

3、 棄上清,，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001）,，混勻后加入凍存管中。

細胞復蘇：

1,、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具）,，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；

3、棄上清,，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4,、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

注意事項：有些細胞比較特殊,，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落,，這是正?，F(xiàn)象,。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min,，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)）,，沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打,，重懸,，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應,。再離心,，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸,。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25）,，補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

售后服務告知書

1）細胞出現(xiàn)問題,，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么,？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題,，細胞丟失、瓶身破損,、培養(yǎng)液嚴重漏液等,，重發(fā)；

2. 細胞污染問題,，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發(fā),；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后,，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活,，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片）,，重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封,，出現(xiàn)污染,，重發(fā)；

5. 細胞活性問題,，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結果,，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照,，3天未告知的,，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的,，并跟技術人員溝通的,，由技術人員判定為我方責任的，重發(fā),。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā),。

二）細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些,？

1. 客戶造成細胞污染,，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,，不重發(fā),；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā),；

4. 細胞狀態(tài)不好,，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā),；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi),，未告知，不重發(fā),；

7. 視具體情況而定,。

ys001C293人胚腎細胞

YS002C973肺腺癌細胞

YS003C16HBE人支氣管上皮細胞

YS004C293A人胚腎細胞

YS005C293T人胚腎細胞

YS006C3T3成纖維細胞

YS007C3T3L1小鼠脂肪細胞

YS008C3T3A31小鼠胚胎成纖維細胞

YS009C4T1小鼠乳腺癌細胞

YS010C769-P腺癌細胞人腎細胞

YS011C786-O腺癌細胞人腎透明細胞

YS012C801-D性肺癌細胞人巨細胞

YS013C低轉移肺癌95-C細胞

YS014C95-D人高轉移肺癌細胞

YS015CA172瘤細胞人膠質(zhì)母細胞

YS016CA2人腺樣囊性癌細胞

YS017C橫紋肌肉瘤A-204細胞

YS018CA2780人卵巢癌細胞

YS019CA3白血病細胞人T淋巴細胞

YS020CA375人惡性黑色素瘤細胞

YS021CA-431人表皮癌細胞

YS022CA498腎癌細胞

YS023CA549肺腺癌細胞

YS024CA7r5大鼠胸主動脈平滑肌細胞

YS025C黑色素瘤A875細胞

YS026CAcc-2人涎腺腺樣囊性癌細胞

YS027CAcc-3人涎腺腺樣囊性癌細胞

YS028CACHN腺癌細胞人腎細胞

YS029CAGS人胃癌細胞

YS030CAM人腺樣囊性癌細胞（高轉移）

YS031CAna-1小鼠巨噬細胞

YS032CAsPc-1人轉移胰腺癌細胞

YS033CAtT20小鼠垂體瘤細胞

YS034CB16小鼠黑色素瘤細胞

YS035CB16BL6小鼠黑色素瘤細胞

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