浙江大學(xué)的邱老師通過介紹聯(lián)系了我們購買HMC-1人肥大細(xì)胞,，經(jīng)過了一周左右的時(shí)間順利發(fā)貨,，
杭州市余杭區(qū)文一西路的邱老師對(duì)我們的細(xì)胞狀態(tài)非常滿意，表示會(huì)向別的老師介紹,，在這里非常感謝邱老師,，HMC-1的培養(yǎng)說明如下：
一,、細(xì)胞培養(yǎng)條件
英文名稱:Hmc-1
中文名稱:人肥大細(xì)胞
生長特性:圓形、懸浮
凍存條件:無血清凍存液
培養(yǎng)體系:IMDM+10%FBS
傳代方法:1:2-1:3,第一次建議1:2傳代
傳代情況:2~3天換液/傳代
備注:用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,，留作過渡培養(yǎng)
HMC-1人肥大細(xì)胞細(xì)胞收到后處理
收到細(xì)胞先不開瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),，100×,，200×各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況,。作為我方進(jìn)行售后的依據(jù),。
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,，先打開外包裝,，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作,，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí),。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí),，可將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml培養(yǎng)基,，放入37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí),，根據(jù)情況傳代或者凍存,，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）
HMC-1人肥大細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1、對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后,，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻,，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng),，視情況傳代或者凍存,。若密度超過80%,，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
3）細(xì)胞凍存：
1,、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次,；
2,、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中,；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃,。
HMC-1人肥大細(xì)胞
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