細(xì)胞貼壁不牢
一 、常見(jiàn)原因分析
消化過(guò)度
胰酶作用過(guò)久/濃度過(guò)高 ：破壞膜表面粘附蛋白 ,，導(dǎo)致無(wú)法重新附著 ,。
吹打力度過(guò)大 ：機(jī)械損傷使胞外基質(zhì)脫落。
環(huán)境因素
pH異常 （如NaHCO?分解致pH過(guò)堿） ：影響整合素介導(dǎo)的粘附 ,。
血清/基質(zhì)不足 ：缺乏纖維連接蛋白 ,、層粘連蛋白等粘附因子 ,。
其他問(wèn)題
支原體污染 ：分泌毒素干擾代謝。
容器材質(zhì)不適 ：玻璃瓶未包被時(shí)粘附率低于TC處理塑料瓶 ,。
二 ,、快速修復(fù)方案
（一 ）緊急處理步驟
輕柔離心重鋪
-收集懸浮細(xì) ，1000rpm離心5min后 ,，用含20%血清的新鮮培養(yǎng)基重懸 ,，接種至預(yù)包被的培養(yǎng)器皿中。
短期高血清支持
-換用含15%-20%血清的培養(yǎng)基（24小時(shí)后恢復(fù)常規(guī)濃度） ,，促進(jìn)粘附蛋白分泌 ,。
（二 ）長(zhǎng)期優(yōu)化措施
問(wèn)題類(lèi)型解決方案
消化控制-縮短胰酶作用時(shí)間（如293T僅需2分鐘）
改用低濃度胰酶（0.05%-0.25%）
容器包被-多聚賴氨酸（0.1mg/ml包被30分鐘）
明膠/鼠尾膠原預(yù)處理瓶底
環(huán)境調(diào)節(jié)-穩(wěn)定CO?濃度（5%）與溫度（37℃±0.5）
檢測(cè)并調(diào)整pH至7.2-7.4
污染排查-支原體檢測(cè)（如PCR） ，污染則棄用并消毒
（三 ）特殊案例處理
HEK293/293T等難貼璧細(xì)胞:
采用無(wú)鈣鎂PBS漂洗后直接換液 ,，減少擾動(dòng) ,。
三 、預(yù)防性建議
傳代時(shí)保留部分舊培養(yǎng)基 （含自分泌粘附因子） ,，與新培養(yǎng)基混合使用 ,。
復(fù)蘇后首周使用高血清培養(yǎng)基 （20%） ，幫助恢復(fù) ,。
通過(guò)上述方法 ,，通常24-48小時(shí)內(nèi)可顯著改善粘附率 。若仍無(wú)效 ,，建議更換新批次細(xì)胞株 ,。
上海雅吉專(zhuān)業(yè)提供細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。細(xì)胞質(zhì)?；蛘T導(dǎo)表達(dá),，穩(wěn)定細(xì)胞株pool，單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株篩選,，藥篩基因去除,，誘導(dǎo)性表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建，轉(zhuǎn)基因表達(dá)鑒定,，包括：基因敲入/敲除,，常規(guī)基因穩(wěn)轉(zhuǎn)、Luc1/2,，誘導(dǎo)性表達(dá),，基因敲入/敲除，常規(guī)基因穩(wěn)轉(zhuǎn),，Cre轉(zhuǎn)染,、單克隆篩選、藥篩基因去除鑒定等,。更多細(xì)胞技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目周期及報(bào)價(jià)咨詢銷(xiāo)售經(jīng)理
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
2
立即詢價(jià)
您提交后，專(zhuān)屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)