原代細胞的生存受多種因素影響,，以下是一些關(guān)鍵要點：
合適的培養(yǎng)環(huán)境
培養(yǎng)基：是為原代細胞提供營養(yǎng)和維持生存的基礎,。不同類型的原代細胞對培養(yǎng)基的需求差異很大，如神經(jīng)細胞通常需要含有特殊生長因子和營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基,，以支持其生長和分化,；而皮膚成纖維細胞則可以在較為通用的 DMEM 培養(yǎng)基中良好生長。
溫度：一般來說,，來源于人體和哺乳動物的原代細胞最適培養(yǎng)溫度為 37℃,，這與體內(nèi)環(huán)境溫度一致。溫度過高或過低都會影響細胞的代謝活動和生理功能,，甚至導致細胞死亡,。
氣體環(huán)境：主要是氧氣和二氧化碳。氧氣是細胞進行有氧呼吸,、產(chǎn)生能量的必要條件,；二氧化碳對于維持培養(yǎng)基的 pH 值穩(wěn)定至關(guān)重要。通常細胞培養(yǎng)需要在含 5% 二氧化碳的培養(yǎng)箱中進行,，以保證培養(yǎng)基的 pH 值維持在 7.2-7.4 之間,。
濕度：培養(yǎng)環(huán)境的濕度應保持在 95% 左右，以防止培養(yǎng)基中的水分蒸發(fā),，維持培養(yǎng)基的成分穩(wěn)定和滲透壓平衡,。
細胞接種密度
原代細胞接種密度過低，細胞之間的相互作用減少,，可能會影響細胞的增殖和存活,；接種密度過高，細胞會過早地接觸抑制,，營養(yǎng)物質(zhì)消耗過快,，代謝廢物積累過多，也不利于細胞的長期生存,。如肝細胞原代培養(yǎng)時,，合適的接種密度可能在每平方厘米 1×10? - 5×10?個細胞。
底物和支架
許多原代細胞具有貼壁生長的特性,，需要合適的底物來附著和鋪展,。細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿表面通常經(jīng)過特殊處理,，以增加細胞的貼壁能力。對于一些特殊細胞,，還需要使用細胞外基質(zhì)成分如膠原蛋白,、纖連蛋白等進行包被，為細胞提供更接近體內(nèi)的微環(huán)境,，促進細胞的附著和生長,。
避免污染
無菌操作：在原代細胞培養(yǎng)的整個過程中，必須嚴格遵守無菌操作原則,。實驗人員要穿戴無菌工作服,、口罩、手套等,，實驗器材和培養(yǎng)基等都要經(jīng)過嚴格的滅菌處理,。
檢測和預防：定期對細胞培養(yǎng)物進行微生物污染檢測，包括細菌,、真菌,、支原體等。一旦發(fā)現(xiàn)污染,，應立即采取措施,，如丟棄受污染的細胞培養(yǎng)物，對培養(yǎng)環(huán)境和器材進行chedi消毒等,。
生長因子和激素
許多原代細胞的生長和生存依賴于特定的生長因子和激素。如表皮生長因子（EGF）可以促進上皮細胞的增殖和分化,；胰島素樣生長因子（IGF）對多種細胞的生長和代謝具有調(diào)節(jié)作用,。在培養(yǎng)原代細胞時，需要根據(jù)細胞類型添加相應的生長因子和激素,，以維持細胞的正常生理功能和生存,。
原代細胞的生存需要在各個環(huán)節(jié)精心把控，為細胞提供最適宜的條件,，才能保證細胞的正常生長和用于各種科學研究及應用,。
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