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羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名：羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Alpha-Toxin gene of Clostridium Perfringens（ELISA）

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒,、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 羊產(chǎn)氣莢膜梭菌病是由產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium Perfringens）引起的,，該菌是動(dòng)物生存環(huán)境中常見的一種梭菌, 它能分解有機(jī)質(zhì)中的糖, 并產(chǎn)生大量氣體和毒素, 導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體組織壞死、中毒甚至死亡,。感染羊后可引起羔羊痢疾,、羊猝疽,、腸毒血癥等疾病,，嚴(yán)重危害養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展,。

本試劑用于檢測(cè)羊血清中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體，可用于羊三聯(lián)四防疫苗免疫效果評(píng)價(jià),。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素蛋白抗原的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)羊血清,、血漿樣本中α毒素抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有α毒素抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液,，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體,。

【試劑盒組成】

【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存,，有效期12個(gè)月。

包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存,，避免受潮,。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm,、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器,。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血,、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋（如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中,，混勻）,。陰、陽性對(duì)照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。

3.陰,、陽性對(duì)照孔分別加入陰,、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。

注：樣本稀釋比例相當(dāng)于1:50,。

4.混勻，蓋好蓋板膜,置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘,。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次，最后一次拍干,。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌,，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,，混勻，蓋好蓋板膜,，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl，混勻,，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）,。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3,，陽性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6,。

【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】

1.樣品的OD值即ODS,；

2.閾值計(jì)算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；

SP值≥0.2,，結(jié)果判定為陽性,；SP值＜0.2，結(jié)果判定為陰性,。

3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明羊只抗體水平不足,，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)羊血清,、血漿中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體，根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng),、中,、弱的粗略評(píng)估。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性,，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗,。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以溶解,。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈,。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮,。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用,。