羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名:羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Alpha-Toxin gene of Clostridium Perfringens(ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒,、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 羊產(chǎn)氣莢膜梭菌病是由產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium Perfringens)引起的,,該菌是動物生存環(huán)境中常見的一種梭菌, 它能分解有機(jī)質(zhì)中的糖, 并產(chǎn)生大量氣體和毒素, 導(dǎo)致動物機(jī)體組織壞死、中毒甚至死亡,。感染羊后可引起羔羊痢疾,、羊猝疽、腸毒血癥等疾病,,嚴(yán)重危害養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展,。
本試劑用于檢測羊血清中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體,可用于羊三聯(lián)四防疫苗免疫效果評價(jià),。
【原 理】
本試劑盒由預(yù)包被產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素蛋白抗原的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測羊血清,、血漿樣本中α毒素抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有α毒素抗體,,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),;加入終止液終止反應(yīng)后,,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,,即可知樣品是否含有產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體,。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
1 | 酶標(biāo)記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
2 | 樣品稀釋液 | 50ml×1(黃蓋) | 50ml×1(黃蓋) | 200ml×1(透明) |
3 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(透明) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白蓋) | 11ml×1(白蓋) | 26ml×1(白蓋) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑蓋) | 11ml×1(棕蓋) | 26ml×1(黑蓋) |
6 | 終止液 | 6ml×1(黃蓋) | 11ml×1(黃蓋) | 26ml×1(黃蓋) |
7 | 陽性對照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
8 | 陰性對照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
9 | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
13 | 稀釋板 | 1 | 2 | 5 |
【儲存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個月,。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,,避免受潮。使用期限為2個月,。
【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,,可調(diào)微量移液器,。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,,無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,,長期需置-20℃保存,。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋(如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中,混勻),。陰,、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液),。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,,設(shè)陰性/陽性對照各2孔,,未用的板條盡快密封,2~8℃保存,。
3.陰,、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
注:樣本稀釋比例相當(dāng)于1:50,。
4.混勻,,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)30分鐘,。
5.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,,重復(fù)洗滌5次,,最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,,蓋好蓋板膜,,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,,同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,,混勻,,蓋好蓋板膜,37℃避光反應(yīng)10分鐘,。
9.每孔加終止液50μl,,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值),。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,,陰性對照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3,陽性對照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】
1.樣品的OD值即ODS,;
2.閾值計(jì)算:SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC);
SP值≥0.2,結(jié)果判定為陽性,;SP值<0.2,,結(jié)果判定為陰性。
3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明羊只抗體水平不足,,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測羊血清、血漿中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體,,根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng),、中、弱的粗略評估,。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,,防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
8.不同批號試劑組分不得混用,。
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