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羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)使用說明書

閱讀:347      發(fā)布時(shí)間:2025-2-19
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羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名:羊產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名:Test Kit for Antibodies to Alpha-Toxin gene of Clostridium Perfringens(ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒,、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 羊產(chǎn)氣莢膜梭菌病是由產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium Perfringens引起的,,該菌是動物生存環(huán)境中常見的一種梭菌, 它能分解有機(jī)質(zhì)中的糖, 并產(chǎn)生大量氣體和毒素, 導(dǎo)致動物機(jī)體組織壞死、中毒甚至死亡,。感染羊后可引起羔羊痢疾,、羊猝疽、腸毒血癥等疾病,,嚴(yán)重危害養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展,。

本試劑用于檢測羊血清中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體,可用于羊三聯(lián)四防疫苗免疫效果評價(jià),。

【原    理】

    本試劑盒由預(yù)包被產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素蛋白抗原的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測羊血清,、血漿樣本中α毒素抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有α毒素抗體,,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),;加入終止液終止反應(yīng)后,,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,,即可知樣品是否含有產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體,。

【試劑盒組成】

序號

名稱

規(guī)格/96T×1

規(guī)格/96T×2

規(guī)格/96T×5

1

酶標(biāo)記物

11ml×1(紅蓋)

11ml×2(紅蓋)

26ml×2(紅蓋)

2

樣品稀釋液

50ml×1(黃蓋)

50ml×1(黃蓋)

200ml×1(透明)

3

20X濃縮洗滌液

40ml×1(白蓋)

40ml×1(白蓋)

200ml×1(透明)

4

底物液A

6ml×1(白蓋)

11ml×1(白蓋)

26ml×1(白蓋)

5

底物液B

6ml×1(黑蓋)

11ml×1(棕蓋)

26ml×1(黑蓋)

6

終止液

6ml×1(黃蓋)

11ml×1(黃蓋)

26ml×1(黃蓋)

7

陽性對照

1.0 ml×1(紅蓋)

1.5 ml×1(紅蓋)

2.0 ml×1(紅蓋)

8

陰性對照

1.0 ml×1(綠蓋)

1.5 ml×1(綠蓋)

2.0 ml×1(綠蓋)

9

酶標(biāo)板

96T×1

96T×2

96T×5

10

蓋板膜

1

2

5

11

自封袋

1

1

2

12

說明書

1

1

1

13

稀釋板

1

2

5

    

【儲存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個月,。

包被板開封后請于2~8℃避光保存,,避免受潮。使用期限為2個月,。

【適用儀器】 450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,,可調(diào)微量移液器,。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,,無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,,長期需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋(如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中,混勻),。陰,、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液),。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,,設(shè)陰性/陽性對照各2孔,,未用的板條盡快密封,2~8℃保存,。

3.陰,、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

注:樣本稀釋比例相當(dāng)于1:50,。

4.混勻,,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)30分鐘,。

5.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,,重復(fù)洗滌5次,,最后一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,,蓋好蓋板膜,,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,,同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,,混勻,,蓋好蓋板膜,37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl,,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值),。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,,陰性對照的平均OD值即ODNC應(yīng)0.3,陽性對照的平均OD值即ODPC應(yīng)0.6,。

【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】

1.樣品的OD值即ODS,;

2.閾值計(jì)算:SP值=(ODS-ODNC/(ODPC-ODNC);

SP值≥0.2,結(jié)果判定為陽性,;SP值<0.2,,結(jié)果判定為陰性。

3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明羊只抗體水平不足,,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測羊血清、血漿中產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素抗體,,根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng),、中、弱的粗略評估,。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,,防止孔口有游離酶不能洗凈,。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

8.不同批號試劑組分不得混用,。

 


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