培養(yǎng)信息:
包被條件PLL(0.1mg/ml)或明膠(0.1%)
培養(yǎng)基含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率每2-3天換液一次
生長特性貼壁
細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性可傳1-2代,;不建議多次傳代
消化液0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
兔外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三,、使用方法
人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈圓形,,在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,,細(xì)胞不增殖;不傳代,;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗,。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作,。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,,放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
2. 懸浮細(xì)胞處理
1)收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中,用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,,收集清洗液,;
2)1200-1500rpm離心3min,棄上清,,收集細(xì)胞沉淀,;
3)加入5mL新鮮培養(yǎng)基,,用吸管輕輕吹打混勻,、分散細(xì)胞;將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中,,置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),;
4)若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大,,無法機(jī)械吹散時,向步驟2)中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,,用吸-管輕輕吹打混勻,,37℃溫浴2-3min,消化結(jié)束后,,加入胰
酶抑制劑(或血清)終止消化,,用吸管輕輕吹打,分散細(xì)胞,;1200rpm離心5min,,棄上清,,
收集細(xì)胞沉淀;
5)加入5mL新鮮培養(yǎng)基,,用吸管輕輕吹打混勻,;按傳代比例進(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,,置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),;
6)待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,,培養(yǎng)觀察,用于實驗,;之后再按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月,。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,,請注意保持無菌操作。
3. 消化過程中,,胰酶消化時間不宜過長,,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,,記錄細(xì)胞狀態(tài),,便于和技術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,,以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研,。
特殊注意事項
6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,,請注意不要直接倒掉,造成損失,;懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小,,離心收集時,請注意懸液中細(xì)胞是否收集,,可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5min,,增加細(xì)胞獲取量。
備注:由于實驗所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同,,以上方法僅供各實驗室參考
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