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培養(yǎng)信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）或明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含F(xiàn)BS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2代,；不建議多次傳代

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔外周血來源內(nèi)皮祖細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài),。

發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三,、使用方法

人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形,，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,，細(xì)胞不增殖；不傳代,；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗,。

客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作,。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜,，放入37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

2. 懸浮細(xì)胞處理

1）收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,，收集清洗液,；

2）1200-1500rpm離心3min，棄上清,，收集細(xì)胞沉淀,；

3）加入5mL新鮮培養(yǎng)基,，用吸管輕輕吹打混勻,、分散細(xì)胞；將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4）若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大,，無法機(jī)械吹散時，向步驟2）中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,，用吸-管輕輕吹打混勻,，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后,，加入胰

酶抑制劑(或血清）終止消化,，用吸管輕輕吹打，分散細(xì)胞,；1200rpm離心5min,，棄上清,，

收集細(xì)胞沉淀；

5）加入5mL新鮮培養(yǎng)基,，用吸管輕輕吹打混勻,；按傳代比例進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

6）待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,，培養(yǎng)觀察，用于實驗,；之后再按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基,。

四、注意事項

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月,。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請注意保持無菌操作。

3. 消化過程中,，胰酶消化時間不宜過長,，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤,、回訪直至問題得到解決。

5. 該細(xì)胞只可用于科研,。

特殊注意事項

6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,，請注意不要直接倒掉，造成損失,；懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小,，離心收集時，請注意懸液中細(xì)胞是否收集,，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5min,，增加細(xì)胞獲取量。

備注：由于實驗所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同,，以上方法僅供各實驗室參考