據(jù)粗略估計,大約三分之一的細胞培養(yǎng)物都感染了支原體,。這些小東西神不知鬼不覺,,侵入你的細胞。由于它們體積小,,生長緩慢,,所以難以察覺。但是,,它們的存在又確實改變了細胞的代謝過程,,繼而干擾你的實驗結(jié)果,或造成無法解釋的差異,。更糟的是,,拯救被感染的細胞幾乎是不可能的任務(wù)。因此,,就支原體污染而言,,預(yù)防是第一要務(wù)。下面介紹了一些簡單的預(yù)防措施,,也許對你有用,。
細胞來源是關(guān)鍵
支原體污染的最常見原因之一是引入的培養(yǎng)物已經(jīng)被感染。一旦進入實驗室,,這些小東西會蔓延到每個角落,,讓你崩潰。要避免這種情況,,簡單的辦法就是不從其他實驗室要細胞,,而從供應(yīng)商或菌種保藏中心(ATCC或ECACC)購買,這些細胞經(jīng)過嚴格檢測,,確保不含有支原體,。
如果購買有難度,或基于其他原因,,不得不使用其他實驗室的細胞,,那么也要保持警惕,在單獨的培養(yǎng)箱中隔離,,同時進行支原體的檢測,。上海瑞鹿生物科技公司提供多種支原體檢測試劑盒,可聯(lián)系咨詢自行選擇,。
定期檢測很重要
即使實驗室沒有新來的細胞,,支原體也可能通過操作人員傳遞到現(xiàn)有的培養(yǎng)物。當(dāng)然,,操作人員并不知道,。支原體污染的另一條路線是通過你的細胞培養(yǎng)試劑。培養(yǎng)基,、酶這些常用試劑,,也有可能被支原體污染。
盡管無法避免人或試劑的污染,,但常規(guī)檢測也能避免情況惡化,。也許,當(dāng)支原體初次感染時,,我們未必能檢測到,,但盡早發(fā)現(xiàn),就能防止這種微生物的傳播,,避免大的損失,。
支原體檢測有很多種。直接培養(yǎng)方法雖然準確率高,,但需要三到四周的時間,。因此,,我們在常規(guī)檢測中使用間接檢測方法已足夠,若發(fā)現(xiàn)陽性,,則后續(xù)可采用較為繁瑣的直接檢測,。常見的間接檢測方法有基于酶活性的熒光和生化分析、PCR分析,、免疫分析等,。
無菌操作要做好
支原體污染的另一個主要源頭是無菌操作不佳。盡管良好的操作可能是簡單的預(yù)防措施,,但說起來容易,,做起來難。每個人都會犯錯,,特別是在重復(fù)勞動時,。因此,實驗室應(yīng)不定期開展培訓(xùn)和監(jiān)督,,以便讓每個人都充分認識到支原體的破壞性,。
許多實驗室目前仍使用抗生素,但細胞培養(yǎng)人員逐漸認識到這是不負責(zé)任的,,因為它帶來了耐藥微生物的問題,。相反,最好依賴自身的無菌操作來預(yù)防支原體,,而只有在懷疑或確認感染的時候才使用抗生素,。
保藏細胞防萬一
最后,通過低溫保藏儲備一些細胞,,以防支原體大面積來襲,。如果支原體有抬頭的跡象,或常規(guī)檢測呈陽性結(jié)果,,那么可靠的補救措施是扔掉所有培養(yǎng)物,,清潔培養(yǎng)箱和超凈臺,一切從頭開始,。當(dāng)然,,你得確保儲備的細胞是不含支原體的。
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