HL-60細胞是通過白細胞分離術從一名患有急性早幼粒細胞白血病的 36 歲白人女性的外周血中分離出來的早幼粒細胞。 HL-60 自發(fā)分化,，丁酸鹽,、次黃嘌呤、佛波醇肉豆蔻酸（PMA,，TPA）,、DMSO（1% to 1.5%）、放線菌素D和視黃酸可以促進分化,。細胞表現(xiàn)出吞噬活性,，并對趨化刺激有響應。致癌基因myc表達陽性,。HL-60人急性早幼粒白血病細胞系可用于免疫紊亂和免疫學研究,。
HL60細胞屬于急髓白血病M3細胞株,穩(wěn)定表達t（15，17）染色體核型以及PML融合基因,，細胞總體形態(tài)為圓形,，細胞膜清晰，細胞質呈多顆粒狀,。
ATCC細胞庫HL-60細胞圖片
細胞庫HL-60細胞圖片
提前開啟紫外照射30min消毒滅菌,，工作臺開燈通風10min,，用75%酒精擦拭臺面,。
器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶,、培養(yǎng)皿,、巴士管、離心管,、移液槍,、槍頭（白色0-10ul；黃色20-200ul,；藍色100-1000ul）、濾器,、吸管,、多孔培養(yǎng)皿,、6cm皿,、10cm皿,，培養(yǎng)瓶等。
試劑：IMDM培養(yǎng)液,、緩沖液,、PBS、消化液,、血清,、抗生素。
形態(tài)特征：淋巴母細胞樣,，懸浮生長
培養(yǎng)基: 80%IMDM+20%FBS +PS
生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳,；溫度：37℃
傳代方法：1:2至1:4,，每周 3次
凍存條件：無血清凍存液（或者冷凍保存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配），液氮儲存
1.收貨時需鏡下拍照（看密度,、狀態(tài)）
2.靜置后需鏡下拍照（看整體密度）
a.如密度50%以下,，建議換液并豎瓶培養(yǎng)
b.如密度50%-80%,，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度
c.如密度90%,，建議傳代
3.換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時（使細胞沉到瓶底）,；收集上清,，必須將瓶內所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集,！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集!離心轉速為1000rpm，5min,。
HL-60細胞復蘇方法
1.將含有1 mLHL-60細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻；
2.在1000 rpm條件下離心3 min,，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻,；
3.將所有HL-60細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）；
4.第二天換液并檢查HL-60細胞密度,。
HL-60細胞傳代方法
如果HL-60細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
方法一：收集HL-60細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘,，棄去上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后,，將剩余HL-60細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
HL-60細胞凍存方法
待HL-60細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例
a.收集HL-60細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，然后進行細胞計數。
b.根據HL-60細胞數量對應加入無血清細胞凍存液,，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細胞懸液,，注意凍存管做好標識。
c.將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
HL-60是?前已?于科學研究的?類??病細胞系，最初是分離??名36歲的?類?性急性早幼粒細胞??病患者,。
HL-60細胞以懸浮培養(yǎng)的形式在含有營養(yǎng)和抗?素的培養(yǎng)基中持續(xù)增殖,，倍增時間約為 36 ? 48 ?時。HL-60 細胞表現(xiàn)出嗜中性早幼粒細胞（neutrophilic promyelocyticmorphology） 形態(tài),，隨后進?的評估則指出其出?成熟的急性?髓性??病。HL-60細胞通過在細胞表?表達的轉鐵蛋?及胰島素受體進?增殖,。如果從??清培養(yǎng)基中除去轉鐵蛋?或胰島素受體其中?項， HL-60 細胞的增殖就會?即停?,。通過?甲基亞砜或維A酸的化合物，可以誘導其分化為成熟的粒細胞;??化三醇,、佛波醇-12-?四烷醯-13-?酸酯及顆粒??球-巨噬細胞集落刺激因?等的化合物,，則可以分別誘導HL-60細胞分化為單核細胞、巨噬細胞樣或嗜酸性粒細胞表型,。
HL-60細胞可以?作研究?理學,、藥理學和病毒學因素對髓樣分化的影響。HL-60細胞模型已經應?于研究DNA拓撲異構酶 IIα 和 IIβ 對細胞分化和凋亡的影響,，并且特 別適?于介電泳研究。此外,，研究?員已使?HL-60細胞來研究細胞內的鈣是否在活性氧誘導的胱天蛋?酶激活中發(fā)揮到作?。HL-60細胞及衍?的分化細胞,，它們的染?質和基因表達譜研究是近年進?的研究,。
1.細胞形態(tài)觀察,。細胞膜是每天必須觀察的,，看是否清晰, HL60細胞的死亡往往是從細胞膜的破裂開始的，早期的表現(xiàn)就是細胞膜某一點出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影,。
2.HL-60細胞在高密度下狀態(tài)比較好，細胞狀態(tài)好時會吸收一些細胞碎片,；
3.低密度時細胞狀態(tài)很差,，傳代比例要控制，當培養(yǎng)密度達到1x106/mL左右時可傳代,，細胞狀態(tài)不好時后面?zhèn)鞔梢圆挥秒x心；
4.DMSO會對HL-60刺激分化,，建議復蘇馬上離心去除DMSO；
5.懸浮細胞對血清要求高,，選用優(yōu)質血清培養(yǎng),；
6.培養(yǎng)過程中盡量不動或少動培養(yǎng)瓶,。
7.HL60細胞往往會有"抱團" 現(xiàn)象，抱團生長或死亡,，勤換液或傳代,，盡量避免細胞抱團,。
8.HL60細胞生長迅速，強烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng),，用小瓶養(yǎng)的話，換液不及時,很容易死亡,。HL60細胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代。
9.HL60細胞對胎牛血清高度依賴,。培養(yǎng)液PH應調為7.20-7.40之間,。
10.防污染。HL60細胞生長迅速,，較少發(fā)生污染，但常規(guī)措施應該做好,。比如無菌操作，酒精消毒等,，培養(yǎng)瓶口建議過火，包括瓶蓋,，應過火4秒左右,。
11.凍存,。-20℃小時, -80℃過夜，液氮長期保存,。強烈建議液氮長期保存,，盡量不要在-80℃長期保存，死亡率很高,。
12.復蘇。調節(jié)水浴箱溫度為42°C,，并提前在試管內放置10倍培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液溫度與室溫一致,。1分鐘內融化細胞（禁止搖晃凍存管），移取至試管內,，動作要輕,，從試管管底開始慢慢,，上提移液管,，使細胞在培養(yǎng)液內分布均勻,，離心，洗2次,。
1.HL-60細胞生長慢,、狀態(tài)差怎么辦
當細胞傳代后生長速度慢且狀態(tài)不佳時,，可豎著培養(yǎng)直到培養(yǎng)基變黃，待細胞密度起來后,，狀態(tài)會有所好轉,。
同時，若HL-60細胞狀態(tài)很差,，可采用半換液的方式：
以T25瓶子為例,，瓶子里有5mL培養(yǎng)基,，豎起瓶子靜置一段時間（豎瓶前拍拍瓶子，讓輕貼底部的細胞團浮起來），待細胞沉底（肉眼觀察細胞沉底情況）,，小心吸出2.5mL的培養(yǎng)基，轉移到離心管,，離心1000rpm 3~5min,，用2.5mL新鮮培養(yǎng)基重懸后再放回原瓶。
2.HL-60細胞什么時候傳代
HL-60細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),，
3.HL-60細胞貼壁嗎
HL-60細胞是懸浮細胞,，不是貼壁細胞,。
4.HL-60細胞用什么培養(yǎng)基
HL-60細胞培養(yǎng)基是80%IMDM+20%FBS +PS
5.HL-60細胞致瘤嗎
Yes, in nude mice（subcutaneous myeloid tumors） .Yes，in semi-solid media,。
6.HL-60細胞受體表達情況
complement, expressed;Fc, expressed。
7.HL-60細胞基因表達情況
tumor necrosis factor （TNF）,，also known as tumor necrosis factor alpha（TNF-alpha, TNF alpha）,，after stimulation with phorbol myristic acid, myc+。
8.HL-60細胞的推薦接種密度是多少
ATCC 建議在補充有 20% 優(yōu)質胎牛血清的 IMDM中以 1.0-2.0 x 10 5 個活細胞/ml 的密度接種,。這些細胞通常會從冷凍保存中緩慢恢復并作為單細胞懸浮液生長,。HL-60細胞在條件培養(yǎng)基中生長良好，只需每 2 或 3 天培養(yǎng)瓶中添加一些新鮮培養(yǎng)基即可,。應經常進行細胞計數,，以確保細胞密度不超過 1 X 10 6 個細胞/ml。
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