分離純化蛋白質(zhì)的原理及方法
(一)利用分子大小?
1、透析:將待提純蛋白質(zhì)放在透析袋中放在蒸餾水中進(jìn)行?,。原理:利用蛋白質(zhì)分子不能透過半透膜的性質(zhì),,使蛋白質(zhì)和其他小分子物質(zhì)如無機鹽、單糖,、水等分開,。?
2、超過濾:利用壓力和離心力,,強行使其他小分子和水通過半透膜,,而蛋白質(zhì)留在膜上。
3,、凝膠過濾層析,。原理:當(dāng)不同分子大小的蛋白質(zhì)混合物流進(jìn)凝膠層析柱時,比凝膠網(wǎng)孔大的分子不能進(jìn)入珠內(nèi)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),,排阻在凝膠珠以外,,在凝膠珠縫隙間隙中向下移動。而比孔小的分子不同程度地進(jìn)入凝膠珠內(nèi),,這樣由于不同大小分子所經(jīng)歷的路徑不同而到分離,。
(二)利用溶解度差別?
4、等電點沉淀,。原理:不同蛋白質(zhì)具有不同的等電點,,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)混合物調(diào)到其中一種蛋白質(zhì)的等電點時,這種蛋白質(zhì)大部分和全部被沉淀下來.,。?
5,、鹽析與鹽溶?。原理:低濃度時,,中性鹽可以增加蛋白質(zhì)溶解度這種現(xiàn)象稱為鹽溶.當(dāng)離子強度增加,,足夠高時,例如飽和或半飽和程度,,很多蛋白質(zhì)可以從水中沉淀出來,,這種現(xiàn)象稱為鹽析。
(三)根據(jù)電荷不同?
6、SDS-PAGE?全稱?十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳,。原理:通過加熱和SDS可以使蛋白質(zhì)變性,,多亞基的蛋白質(zhì)也解離為單亞基,處理后的樣品中肽鏈?zhǔn)翘幱跓o二硫鍵連接的,,分離的狀態(tài)。電泳時SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物在凝膠中的遷移率不再受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響,,而主要取決于蛋白質(zhì)分子量,。所以SDS-PAGE常用來分析蛋白質(zhì)的純度和大致測定蛋白質(zhì)的分子量。?
7,、離子交換層析,。原理:氨基酸分離常用陽離子交換樹脂,樹脂被處理成鈉型,,將混合氨基酸上柱,,氨基酸主要以陽離子形式存在,在樹脂上與鈉離子發(fā)生交換,,而被掛在樹脂上,。
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