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ATCC細(xì)胞操作指南

收到細(xì)胞的注意事項(xiàng)

　　凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交瘤細(xì)胞株在運(yùn)送過程中使用干冰保持低溫。收到凍存細(xì)胞后,，可以立即解凍復(fù)蘇,，去除二甲基亞砜（DMSO）后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞,，必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐存儲(chǔ)

,。請(qǐng)不要將細(xì)胞存儲(chǔ)在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,，達(dá)不到-130℃,，細(xì)胞活力會(huì)迅速下降。

　　產(chǎn)品說明書和質(zhì)檢報(bào)告（COA）

　　ATCC每個(gè)細(xì)胞株都有一份產(chǎn)品說明書（product sheet）,，其中包含細(xì)胞株的信息和詳細(xì)的操作指南,。細(xì)胞株的所有詳細(xì)介紹可以在ATCC網(wǎng)站找到，產(chǎn)品說明書和COA也可以從ATCC網(wǎng)站下載,。

　　凍存細(xì)胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)

　　1.先準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基。并在37℃水浴中預(yù)先溫?zé)峒?xì)胞培養(yǎng)基,。

　　2.小心取出裝有細(xì)胞的凍存管,，保持管蓋擰緊,，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應(yīng)該盡快,，大約短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛?cè)诨?，就?yīng)將細(xì)胞凍存管取出水浴。

　　3.在從水浴中取出的細(xì)胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,，用無菌紙巾或紗布試干,。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴(yán)格操作。

　　4.小心擰開凍存管的頂部,，將管內(nèi)容物用1ml移液槍轉(zhuǎn)移到含9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中,。離心5到7分鐘(125×g),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜)，避免丟失細(xì)胞沉淀,。

將細(xì)胞沉淀重懸于配好的培養(yǎng)基中

,。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細(xì)胞均勻的分布,。

生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞株可重懸于5-8ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶,。生長(zhǎng)較快的細(xì)胞株可重懸于12-20ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。ATCC網(wǎng)站有各個(gè)細(xì)胞株的具體生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)方法記載,。

　　5.將細(xì)胞培養(yǎng)容器置于細(xì)胞培養(yǎng)箱,，在溫度37℃,二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行孵育。細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)狀況,。

　　為了確保細(xì)胞活力,、遺傳基因型穩(wěn)定和表型的穩(wěn)定，細(xì)胞株的培養(yǎng)需要保持在對(duì)數(shù)期,。這意味著需要定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,。并且注意在細(xì)胞進(jìn)入生長(zhǎng)平臺(tái)期之前，

即單層細(xì)胞100%匯合長(zhǎng)滿前或懸浮細(xì)胞達(dá)到其推薦的最大細(xì)胞密度之前,，要進(jìn)行細(xì)胞傳代。監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)和繪制每個(gè)細(xì)胞株的生長(zhǎng)曲線都有助于確定細(xì)胞株的生長(zhǎng)特性,。