日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

胰酶消化步驟以及注意事項

常規(guī)細胞培養(yǎng)實驗過程中，貼壁細胞的傳代培養(yǎng),、凍存保種,，都離不開胰酶消化，如何將細胞完好的消化下來,，則依賴于對胰酶的優(yōu)先選擇以及操作手法,。

01關(guān)于胰酶

胰酶全稱胰蛋白酶（Trypsin），是胰臟中提取的一種絲氨酸蛋白水解酶,，主要作用是使細胞間的蛋白質(zhì)（如細胞外基質(zhì)）水解,，改變細胞間的連接，使貼壁細胞從瓶壁上脫落并分離單個的細胞,。

消化步驟

01去掉培養(yǎng)液,，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清,。

02加入少量胰酶細胞消化液,，略蓋過細胞即可，根據(jù)胰酶效率差異可以增加或減少用量,。在室溫下放置30秒至2分鐘（不同的細胞的消化時間也不同）

03肉眼觀察瓶壁由半透明（細胞單層連接成片,，如磨砂玻璃）轉(zhuǎn)為透明、點狀（出現(xiàn)細小空隙）時,，或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可,。

04此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的細胞培養(yǎng)液,，吹打下細胞,，即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化,。

注意事項

1,、如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞,，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落（如見大量細胞片狀脫落,，就是消化過頭了），直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來,。1000-2000g離心1分鐘,，

沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后,，加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細胞,，即可用于后續(xù)實驗,。

2,、影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性,、消化時的溫度以及所加胰酶量等 ,。