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流式抗體（熒光抗體）細(xì)胞染色步驟與注意

染色緩沖液（BSA）的配制：

PBS含有1% FBS和0.09% NaN3,，置于冰上或4度冰箱備用,。

準(zhǔn)備單細(xì)胞懸液：淋巴組織、骨髓,、血液或培養(yǎng)的細(xì)胞,。

用冰染色緩沖液洗細(xì)胞2次，離心細(xì)胞,，用冰染色緩沖液重懸細(xì)胞,，使終濃度為2×107細(xì)胞/ml。

各取50ul（106細(xì)胞）細(xì)胞懸液到2個(gè)圓底的Ep管中,。

根據(jù)抗體說明書在其中1個(gè)Ep管中加入合適的抗體量,，另外1個(gè)加入同型對(duì)照抗體，冰上避光孵育20分鐘（建議每5分鐘輕輕混勻,，以免細(xì)胞沉積）,。根據(jù)熒光抗體的親和力適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。

用1ml染色緩沖液洗2次去除未結(jié)合的抗體,，300×g離心5分鐘,，每次離心后小心吸取上清。

用適量染色緩沖液（如500ul）重懸細(xì)胞,。

流式細(xì)胞儀分析染色結(jié)果（不超過4小時(shí)）,。如果暫時(shí)無(wú)法檢測(cè)，也可以將染色后的細(xì)胞用4%多聚甲醛固定后,，避光儲(chǔ)存在4度,。固定后的細(xì)胞可以保存zui多一個(gè)星期。